硒對高同型半胱氨酸血癥誘導的自發(fā)性高血壓大鼠主動脈損傷的影響.pdf

1、目的及意義：
　　高同型半胱氨酸血癥是動脈硬化性疾病的獨立危險因素。臨床研究證實，當高同型半胱氨酸血癥合并高血壓時可使心腦血管疾病風險驟然上升。動物實驗也觀察到，給予SHR大鼠及正常血壓大鼠高蛋氨酸飲食后，SHR大鼠主動脈損傷較正常血壓大鼠嚴重。氧化應激被認為是高同型半胱氨酸血癥相關病理改變的主要生化機制，但同型半胱氨酸在高血壓機體內導致氧化應激的具體機制并不明確。硒是人體內一種重要的微量元素，其生物學作用主要表現(xiàn)在體內含硒蛋白酶

2、的功能。GPX-1是體內含硒蛋白酶的一種，其在體內的作用主要是抗氧化，維持細胞內氧化還原平衡。本實驗旨在初步探討高同型半胱氨酸血癥致SHR大鼠主動脈損傷的可能機制以及觀察不同硒水平對高同型半胱氨酸所致的SHR大鼠主動脈損傷的影響。
　　方法：
　　30只6周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠隨機分為6組，每組5只：①普通組（Nor組）：正常硒含量飼料喂養(yǎng)14周+4天；②低硒組（低Se組）：低硒飼料喂養(yǎng)14周+4天；③低硒+高同型半胱氨酸

3、組（低Se+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，最后3周注射DL-Hcy；④4μg/kg Na2SeO3+Hhcy（4μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO34μg/kg.bw）；⑤40μg/kg Na2SeO3+Hhcy（40μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO340μg/kg.bw）；⑥80μg/kg Na

4、2SeO3+Hhcy（80μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO380μg/kg.bw）。通過尾袖法監(jiān)測SHRs收縮壓和心率變化，監(jiān)測大鼠體重，根據體重結果注射相應劑量藥物，并且評估藥物對大鼠體重的影響；尾靜脈采血，檢測血漿中Hcy濃度。實驗結束后麻醉大鼠，取大鼠主動脈標本用于以下檢測：血管張力實驗，評估血管內皮依賴性舒張功能；化學發(fā)光法測活性氧及NADPH氧化酶（NO

5、X）活性；透射電鏡觀察線粒體等超微結構改變；HE染色及Masson染色，觀察血管形態(tài)、內皮完整性、內膜厚度及血管膠原沉積情況等；western blot檢測血管組織中GPX-1蛋白表達。
　　結果：
　　1、各模型組注射同型半胱氨酸后，測得血漿同型半胱氨酸水平明顯升高，與Nor組比較有明顯差異（p<0.01），說明高同型半胱氨酸血癥SHR大鼠模型造模成功；而各硒補充組間比較無統(tǒng)計學差異（p>0.05）。
　　2、各組大

6、鼠一般情況：大鼠體重隨著周齡逐漸增加，同段時間各組比較無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；實驗結束后，低Se組及低硒+Hcy組收縮壓較其它組升高7-8mmHg，各組大鼠心率比較無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　3、各組大鼠主動脈病理形態(tài)學改變：低硒組與Nor組比較，其主動脈內皮細胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細胞增殖及膠原沉積明顯。低Se+Hcy組大鼠與低Se組比較，主動脈內皮細胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細胞增殖及膠原沉積更明顯，而硒補充

7、組與低Se+Hcy組比較，其主動脈內皮細胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細胞增殖及膠原沉積明顯改善，且隨硒水平的升高，改善明顯。
　　4、各組大鼠主動脈內皮依賴性舒張功能：低Se組較Nor組舒張百分比下降，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），低Se+Hcy組舒張百分比較低Se組明顯下降，差異有統(tǒng)計意義（p<0.05）；各硒補充組舒張百分比較低Se+Hcy組升高，且與劑量呈正相關，其中40μgSe+Hcy組及80μgSe+Hcy組升高明顯（

8、p<0.05）。
　　5、各組大鼠主動脈活性氧（ROS）水平：低Se組較Nor組ROS產生明顯增加（p<0.05），低Se+Hcy組較低Se組明顯增加（p<0.05），各硒補充組較低Se+Hcy組有所下降，與劑量呈負相關。加入NADPH氧化酶抑制劑（DPI）預處理后，各組ROS產生均較前明顯減少（p<0.05）；加入線粒體復合物Ⅰ抑制劑（ROT）預處理后，低Se組、低Se+Hcy組ROS較前減少，其中低Se+Hcy組減少明顯（p<

9、0.05）；而一氧化氮合酶抑制劑（L-NAME）預處理后，無明顯差異。
　　6、各組大鼠主動脈NADPH氧化酶（NOX）活性：低Se+Hcy組較Nor組、低Se組升高明顯（p<0.05），而硒補充組較低Se+Hcy組下降，與劑量呈負相關，其中40μgSe+Hcy組及80μgSe+Hcy組下降明顯（p<0.05）。
　　7、各組大鼠主動脈谷胱甘肽過氧化酶-1（GPX-1）蛋白表達：Nor組、低Se組之間比較，無明顯差異（p>0