ISSR技術(shù)應(yīng)用于我國利什曼原蟲系統(tǒng)發(fā)生的研究.pdf

1、利什曼原蟲種類繁多，他們在流行病學(xué)、生物學(xué)及感染宿主的臨床癥狀等方面均存在差異。我國不僅存在能對人致病的嬰兒利什曼原蟲和杜氏利什曼原蟲，也存在僅感染動物的利什曼原蟲種株，且其宿主和媒介亦具多樣性和交差性。同種利什曼原蟲不同地域分離株如嬰兒利什曼原蟲，可導(dǎo)致不同的臨床癥狀。因此，開展對利什曼原蟲系統(tǒng)發(fā)生的研究不僅有助于利什曼病的分子流行病學(xué)研究，也有助于蟲株鑒定，對于選擇恰當(dāng)?shù)闹委煷胧┘爸贫ê线m的控制策略也非常必要。 本研究通過選

2、用21種單引物對30株有代表性的利什曼原蟲分離株進(jìn)行了簡單重復(fù)序列間區(qū)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ISSR-PCR)擴(kuò)增，經(jīng)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳配合銀染方法獲得ISSR帶譜，共計(jì)866條多態(tài)性條帶，再根據(jù)蟲株間ISSR帶譜的相似程度和相異程度計(jì)算出Jaccard相似系數(shù)和Nei遺傳距離。在此基礎(chǔ)上分別構(gòu)建了UPGMA和Neighbour Joining系統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果表明這30株蟲株可聚類為6組：我國可致人利什曼病的蟲株與杜氏利什曼原蟲參照株“

3、DD8”為一組；嬰兒利什曼原蟲參照株“LEM”、碩大利什曼原蟲參照株“5AS”、熱帶利什曼原蟲參照株“K27”以及埃塞俄比亞利什曼原蟲參照株“L100”為一組；屬于Viannia亞屬的巴西利什曼原蟲參照株“2903”沒有與上述屬于利什曼亞屬的蟲株聚在一起，單獨(dú)為一組；都蘭利什曼原蟲參照株“3720”與我國新疆克拉瑪依和奇臺縣的以大沙鼠為宿主的都蘭利什曼原蟲分離株聚為一組；沙鼠利什曼原蟲參照株“GER”、新疆克拉瑪依白堿灘大沙鼠分離株“K

4、-7”和內(nèi)蒙古額濟(jì)納旗大沙鼠分離株“E154”聚為一組；內(nèi)蒙古額濟(jì)納旗的蜥蜴分離株“LIZ”、新疆克拉瑪依阿帕克司白蛉分離株“K-E”和一株甘肅內(nèi)臟利什曼病病人的分離株“LUO”為一組。此外，對蟲株的ISSR特征進(jìn)行了主成分分析。幾種方法的聚類結(jié)果與傳統(tǒng)的分類方法鑒定結(jié)果符合程度相當(dāng)高，表明此方法可用于蟲株的快速鑒定，本研究的結(jié)果顯示以前未被鑒定的分離株“K-E”、“Q-4"和“E154”分別為蜥蜴利什曼原蟲、都蘭利什曼原蟲和沙鼠利什曼