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文檔簡介
1、免疫系統(tǒng)是人體內(nèi)重要的防御性系統(tǒng),免疫系統(tǒng)的任何結(jié)構(gòu)改變和功能失調(diào),將使機(jī)體免疫抗病能力降低,引起各種感染性疾病、自身免疫性疾病或腫瘤。近年來,生物藥品和生物材料新產(chǎn)品層出不窮,而由于新產(chǎn)品添加成分不當(dāng)而對人體健康產(chǎn)生危害的事例也日漸增多,人們越來越關(guān)注生物藥品和生物材料的使用安全性。而對其使用安全性評價的一個重要方面即是對生物材料免疫安全性的評價。
本研究選取了兩種膠原蛋白類植入性生物材料--膠原基仿生骨基質(zhì)和纖維蛋白止
2、血敷料,根據(jù)相關(guān)潛在免疫毒性效應(yīng)的免疫反應(yīng)的類型,針對炎癥、免疫抑制和免疫刺激3種免疫效應(yīng)進(jìn)行研究,設(shè)計了大鼠體內(nèi)埋植實驗,研究這兩種生物材料是否會對大鼠免疫系統(tǒng)造成影響。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
1.選取Wistar大鼠作為實驗動物,將膠原基仿生骨基質(zhì)和羥基磷灰石進(jìn)行大鼠股骨側(cè)埋植,將纖維蛋白止血敷料、纖維蛋白原和膠原蛋白進(jìn)行大鼠肝臟埋植,至少暴露28d;選擇了適應(yīng)于實驗動物埋植部位的最大埋植量,即膠原基仿生骨基質(zhì)材料埋
3、植1cm×0.1cm×0.3cm,羥基磷灰石埋植1cm×0.1cm×0.1cm,纖維蛋白止血敷料埋植1cm×1cm×0.4cm,纖維蛋白原埋植1cm×1cm×0.4cm,膠原蛋白埋植1cm×1cm×0.4cm。同時設(shè)免疫抑制組(即腹腔注射10mg/mL環(huán)磷酰胺)作為陽性對照,假手術(shù)組作為陰性對照,將已有的無免疫毒性或低免疫毒性的材料(羥基磷灰石、纖維蛋白原和膠原蛋白)作為平行對照。
2.對大鼠進(jìn)行癥狀和體征觀察、白細(xì)胞、淋
4、巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞絕對值計數(shù)、免疫器官指數(shù)分析、免疫器官組織學(xué)分析、NK細(xì)胞殺傷活力檢測、T淋巴細(xì)胞亞群分析、巨噬細(xì)胞分泌功能檢測和血清中免疫球蛋白IgG和IgM的測定,實驗結(jié)果顯示:
(1)腹腔注射10mg/mL環(huán)磷酰胺(30mg/kg體重),連續(xù)4天可成功建成大鼠免疫抑制模型。免疫抑制組大鼠出現(xiàn)明顯的口鼻黏膜出血、面部腫大;免疫器官出現(xiàn)明顯病變;免疫抑制組大鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞絕對值計數(shù)、免疫器官指數(shù)、NK細(xì)
5、胞殺傷活力、T淋巴細(xì)胞亞群、巨噬細(xì)胞分泌IL-1、IL-6、TNF-α和血清中免疫球蛋白IgG和IgM含量均顯著低于陰性對照組(P<0.05);
(2)各埋植組(膠原基仿生骨基質(zhì)、纖維蛋白止血敷料、羥基磷灰石、纖維蛋白原和膠原蛋白埋植)大鼠在術(shù)后與陰性對照組相比,進(jìn)食飲水正常,精神狀態(tài)良好,傷口愈合良好;體重增加正常,與陰性對照組相比無顯著差異(P>0.05);
(3)各埋植組大鼠白細(xì)胞均未見異常減少和增多,
6、白細(xì)胞計數(shù)與陰性對照組相比無顯著差異(P>0.05);手術(shù)后第2周開始,各埋植組的淋巴細(xì)胞絕對值恢復(fù)至正常水平,與陰性對照組相比無顯著差異(P>0.05):
(4)各埋植組大鼠在術(shù)后與陰性對照組相比,脾臟指數(shù)和肝臟指數(shù)均無顯著差異(P>0.05);
(5)免疫器官病理學(xué)切片分析結(jié)果表明,各埋植組大鼠在進(jìn)行手術(shù)后與陰性對照組相比,埋植部位組織、脾臟、胸腺和腹腔淋巴結(jié)均無病變,結(jié)構(gòu)正常;
(6)各埋
7、植組大鼠在術(shù)后與陰性對照組相比,NK細(xì)胞殺傷活力無顯著性差異(p>0.05),并且與NK細(xì)胞自然死亡率有顯著性差異(P<0.05);
(7)各埋植組大鼠在術(shù)后與陰性對照組相比,除第2周有微弱上升外,CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞含量、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞含量均無大幅變化,整體趨勢平穩(wěn),CD4+/CD8+比值也沒有出現(xiàn)下降,與陰性對照組無顯著性差異(P>0.05);
(8)血清中IL-1、IL-6和TNF-α
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