DDH-,2-在非小細胞肺癌中的表達及其反義寡核苷酸對A549細胞影響的研究.pdf

1、急性淋巴細胞性白血病(ALL)是小兒腫瘤中最常見的疾病，占整個兒童白血病的80[％]左右。到目前為止，盡管白血病的發(fā)病分子機制仍不清楚，但學術界普遍認為，白血病的發(fā)病與環(huán)境及遺傳等因素有關，癌基因(Oncogene)和抑癌基因(TSG)在腫瘤發(fā)生中扮演著重要角色。已證實細胞的惡性轉歸是癌基因活化或(和)TSG失活的結果。而且在許多組織中，TSG的失活是腫瘤生成的主要機制。發(fā)現(xiàn)新的TSG，將正常的TSG導入白血病細胞中，去代替或補償缺失或

2、突變的TSG，是目前白血病基因治療的新策略之一。 細胞遺傳學和分子遺傳學的研究表明，幾乎所有的腫瘤細胞都存在染色體片段的非隨機性丟失。這意味著這些丟失的片段中可能包含著某些與腫瘤發(fā)生相關的基因。兒童ALL在多條染色體上存在雜合性缺失(LOSS ofHeterozygosity，LOH)，6號染色體長臂(6q)是ALL中最常出現(xiàn)LOH的區(qū)域之一。在ALL中已證實了一些共同缺失區(qū)：6q12-21、6q14-2l、6q21、6q21-

3、22、6q21-23、6q23、6q23-24、6q23.1-27及6q25-27。報道的幾個常見的6q最小缺失區(qū)(RegionsofMinimal Deletion，RIVID)均包括6q21帶，提示可能有TSG定位于這個區(qū)域內(nèi)。國外研究報道，在6q21的微衛(wèi)星位點D6S1709-D6S434附近區(qū)域存在高頻率的等位基因LOH，本實驗室的前期研究采用更高密度的微衛(wèi)星位點分析發(fā)現(xiàn)在D6S1709-D6S301之間存在一個2cM的最小共同

4、缺失區(qū)，上述研究表明，在此最小區(qū)域內(nèi)，可能存在一個或多個TSG。 細胞周期蛋白C(CyclinC，CCNC)是發(fā)現(xiàn)較晚的一類細胞周期蛋白，位于6q21，目前對其在細胞周期中的作用研究不多，初步的功能研究表明CCNC參與了細胞周期G<,l>／S期的轉換，也有學者認為CCNC在G。期末表達達到最高水平，故認為C是G。期的調(diào)節(jié)蛋白，在人類細胞再進入細胞周期中起著關鍵的調(diào)節(jié)作用。 并作為1a<,,25>(OH)<,2>D<,3>

5、的靶基因之一，與其調(diào)節(jié)細胞生長的功能密切相關。有學者對具有6q缺失的兒童ALL的CCNC的表達進行檢測后發(fā)現(xiàn)了90％以上的患兒存在有CCNC的表達缺失，并推測CCNC可能是兒童ALL中的一個重要的TSG，但目前為止，對于CCNC在兒童ALL的發(fā)病中所起的作用及作用機制如何，尚缺乏研究。我們的實驗通過探討CCNC在兒童ALL中的表達，希望明確其在白血病發(fā)病中所起的作用并初步研究其可能的作用機制。 本實驗用實時熒光定量PCR檢測了C

6、CNC在兒童ALL及正常小兒骨髓中的mRNA表達情況，結果發(fā)現(xiàn)，癌旁組織(34.4％、31.2％)與良性肺組織(12.5％、18.7％)；在有淋巴結轉移的癌組織中：DDH與VEGF陽性表達率較無淋巴結轉移的癌組織高，在I、Ⅱ期肺癌組織中兩者的表達陽性率低于Ⅲ期組織，與其它臨床特征無關；轉染反義DDH<,2>寡核苷酸后，細胞中DDH2mRNA和蛋白水平均明顯低于兩對照組；實驗組A549細胞的存活率明顯低于兩對照組；注射反義DDH<,2>寡

7、核苷酸的裸鼠腫瘤的體積與重量均明顯低于對照組。 結論:非小細胞肺癌患者血清DDH濃度明顯高于非腫瘤患者，手術前后其血清濃度有明顯的變化，其可能可作為非小細胞肺癌的腫瘤標志物；DDH與VEGF在非小細胞肺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織與肺的良性病變組織，兩者可能參與非小細胞肺癌的發(fā)生與增值，而且兩者之間可能有一定的相關性；有淋巴結轉移的腫瘤組織中DDH與VEGF表達較無淋巴結轉移的腫瘤組織高，兩者可能與非小細胞肺癌的淋巴轉移有關；