臍血間充質細胞誘導分化成肝細胞及治療肝損傷的研究.pdf

1、目的:將來源于健康產婦的臍帶血進行體外分離、培養(yǎng)出間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，在特定環(huán)境下誘導成肝樣細胞并進行鑒別，觀察MSCs及肝樣細胞對大鼠慢性肝損傷的修復作用，為終末期肝病的肝細胞移植治療和生物型人工肝提供一種新的細胞來源。 方法:采集正常產婦臍帶血，密度梯度離心法和貼壁法分離、培養(yǎng)、純化臍血MSCs；流式細胞儀檢測MSCs表面抗原CD34、CD44表達情況；用肝細胞生長因子(hep

2、atocytegrowthfactor，HGF)及成纖維細胞生長因子-4(Fibroblastgrowthfactor-4)聯(lián)合誘導P3代的MSCs成肝樣細胞；采用免疫細胞化學法檢測肝樣細胞標志物的表達情況并進行糖原染色檢測細胞糖原表達；采用透射電鏡觀察MSCs和誘導的肝樣細胞的超微結構；將MSCs及誘導后的肝樣細胞輸注入慢性肝損傷的大鼠體內，取肝臟病理，觀察兩者對肝損傷的修復情況。 結果 1.接種的MSCs于48～72

3、h后貼壁，巢樣克隆，梭形，折光性強，3天后梭形細胞體積開始增大，15天后出現(xiàn)梭形細胞集落，呈平行或火焰狀排列或漩渦狀生長，三周后細胞呈80～90％融合；細胞傳至第三代時，呈較均一的長梭形，形態(tài)基本無變化。 2.經過傳代、純化、誘導的細胞經3～4周，呈放射狀的細胞排列結構逐步消失，長梭形細胞變類圓形或多角形，存在離散現(xiàn)象，胞漿出現(xiàn)顆粒，部分出現(xiàn)雙核。 3。標志物檢測：非誘導組始終沒有見到肝細胞的標志物白蛋白(albium，

4、ALB)、糖原表達，甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)第0天有少量表達，此后不再表達；誘導組可以檢測到肝細胞的標志物AFP、ALB和糖原的明顯的表達。 4.培養(yǎng)至第三代的細胞表面抗原為CD44+/CD34-的細胞占(98.59±4.53)％。 5.移植了人MSCs及誘導后的肝樣細胞的大鼠肝損傷病理輕于無治療組，肝樣細胞組的病理損傷輕于MSCs組。 結論: 1.使用密度梯度離心法和貼壁法相