水通道蛋白AQP-1、AQP-4與慢傳輸型便秘的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:當(dāng)前社會,隨著人們飲食習(xí)慣的改變和生活節(jié)奏的加快,便秘已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人們健康和日常生活工作的一種常見疾病。世界衛(wèi)生組織專門為此制定了羅馬-Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)來指導(dǎo)臨床便秘的診斷和治療。其中慢傳輸型便秘是其中最為常見和嚴(yán)重的一種類型,具體到臨床就是指患者出現(xiàn):大便量太少、太硬、排出太困難,或合并一些特殊癥狀,如:長時(shí)間用力排便、直腸脹感、排便不盡感,甚至需用手法幫助排便;在不使用瀉劑的情況下,7天內(nèi)自發(fā)性排空糞便不超過2次或長期無便意。便

2、秘患者特別是慢傳輸型便秘患者往往是十分痛苦的,而且常常引起其它疾病,危害人類健康。因此,如何更好,更徹底的治愈此病就成為醫(yī)務(wù)工作者的責(zé)任,但是治病求因,而當(dāng)前對于便秘的發(fā)病原因的研究尚處于起步階段,鑒于此,本研究試從分子生物學(xué)角度來探討慢傳輸型便秘的發(fā)病原因。應(yīng)用免疫組化、圖像分析等技術(shù)來研究AQP-1、AQP-4在慢傳輸型便秘患者結(jié)腸黏膜上的表達(dá)與正常人結(jié)腸黏膜上表達(dá)的差異來推斷,水通道蛋白AQP-1、AQP-4在慢傳輸型便秘患者疾病

3、發(fā)生發(fā)展中所起的作用及意義。
　　 方法:選取河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院肛腸外科08年9月份-09年11月份經(jīng)初診,詳細(xì)詢問病史、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查等排除腸梗阻和巨結(jié)腸等其它器質(zhì)性病變,符合羅馬-Ⅲ標(biāo)準(zhǔn),行3粒標(biāo)記物120小時(shí)法結(jié)腸傳輸試驗(yàn),結(jié)果回報(bào)72-120小時(shí)尚有≥20％的標(biāo)記物殘存于結(jié)腸中的慢傳輸型便秘患者25例,所有患者均住院行結(jié)腸次全切除手術(shù),術(shù)后標(biāo)本取近端升結(jié)腸和遠(yuǎn)端降結(jié)腸,每位患者各取兩處;取正常人(為無便秘及長期服

4、用瀉劑輔助排便病史者,無腹瀉等其他類似病史者)的升結(jié)腸和降結(jié)腸結(jié)腸標(biāo)本20例作為對照組。分組方法:全部標(biāo)本分為四組,①試驗(yàn)組1:慢傳輸型便秘患者25例的升結(jié)腸結(jié)腸標(biāo)本,男性2例,女性23例,年齡36～71歲,平均年齡48.60±2.00歲,便秘病史1～23年,平均5.25±1.50年:②試驗(yàn)組2:慢傳輸型便秘患者的降結(jié)腸結(jié)腸標(biāo)本,患者資料同①;③對照組1:無便秘史患者升結(jié)腸部位標(biāo)本20例,男性1例,女性19例,年齡33～68歲,平均年齡

5、43.72±1.50歲:④對照組2:同對照組1,取其降結(jié)腸部位標(biāo)本。試驗(yàn)組和對照組的性別、年齡、病史的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 所取標(biāo)本全部用4％多聚甲醛灌流固定,24小時(shí)后將固定好的組織塊經(jīng)常規(guī)梯度酒精脫水,二甲苯透明,石蠟包埋。接下來把包埋好的石蠟塊在切片機(jī)上,連續(xù)切片,厚度為5μm,取其中四片分別裱于涂有蛋白甘油(用于普通HE染色)及多聚賴氨酸(用于免疫組織化學(xué)染色)的載玻片上,最后分別用HE和免疫組化的方式給選取的切片染

6、色。最后在高倍鏡下分別觀察AQP-1、AQP-4的表達(dá)并用人工計(jì)數(shù)和自動圖像分析兩種方法檢測其在正常人結(jié)腸與慢傳輸型便秘患者中結(jié)腸的表達(dá)差別。
　　 結(jié)果:
　　 1 AQP-1在25例慢傳輸型便秘患者和20例正常人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞頂端、基底側(cè)和腔面都有表達(dá),且主要表達(dá)于吸收細(xì)胞,杯狀細(xì)胞有少量表達(dá),表達(dá)陽性率為100％。表達(dá)部位在升結(jié)腸和降結(jié)腸無明顯差異(p＞0.05)。但慢傳輸型便秘患者(試驗(yàn)組)結(jié)腸黏膜細(xì)胞上的表達(dá)

7、明顯高于正常人(對照組)結(jié)腸黏膜細(xì)胞上的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后顯示慢傳輸型便秘患者即實(shí)驗(yàn)組和正常人即對照組結(jié)腸黏膜上AQP-1表達(dá)有顯著差異,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2 AQP-4在正常人(對照組)升結(jié)腸和降結(jié)腸結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞上未見表達(dá),在慢傳輸型便秘患者(試驗(yàn)組)升結(jié)腸結(jié)腸上皮細(xì)胞有少量表達(dá),降結(jié)腸上無表達(dá)。其中25例慢傳輸型便秘患者僅有4例發(fā)現(xiàn)有少量AQP-4在升結(jié)腸結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的基底部位有少量表達(dá),陽性

8、表達(dá)率不足20％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后顯示慢傳輸型便秘患者即實(shí)驗(yàn)組和正常人即對照組結(jié)腸黏膜上AQP-4表達(dá)無顯著性差異,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 AQP-1在全結(jié)腸都有表達(dá),升結(jié)腸和降結(jié)腸無差異,但慢傳輸型便秘患者結(jié)腸黏膜與正常人結(jié)腸黏膜相比顯著高表達(dá)。說明AQP-1在結(jié)腸對于水的重吸收中起了重要作用,可能對于慢傳輸型便秘的發(fā)生、發(fā)展有一定的作用。
　　 2 AQP-4在本實(shí)驗(yàn)研究中正常