TNFα對(duì)暴發(fā)性肝衰竭小鼠腦組織中AQP-4蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、重型肝炎很容易并發(fā)肝性腦病，有超過80％的患者發(fā)生腦水腫，是重型肝炎患者的直接死亡原因，腦水腫的發(fā)生機(jī)制不很清楚。有研究認(rèn)為水通道蛋白與腦水腫的病理生理相關(guān)。在正常腦組織中，AQP-4是尤其重要的水通道蛋白。本研究的目的是探討TNFα對(duì)重型肝炎時(shí)腦組織AQP-4的表達(dá)情況影響及意義。 材料和方法 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組： 雄性Balb/c小鼠，6-8周齡，體重18-22g，SPF級(jí)，隨機(jī)分為8組。生理鹽水對(duì)照組；LP

2、S對(duì)照組；GalN對(duì)照組；LPS肝衰竭組(12S+GalN)2、6、9h；TNFα肝衰竭組(TNFα+GalN)2、6、9h；TNFα抗體組(抗TNFα-IgG抗體+TNFα+GalN)；抗TNFα-β1抗體組：(抗TNFα-R1抗體+TNFα+GalN)；TNFα對(duì)照組。 2．模型建立 腹腔注射GalN、TNFα、Lps建立FHF小鼠模型。注射GalN/TNFα前30分鐘經(jīng)尾靜脈注射抗TNFα-IgG抗體和抗TNFα-

3、R1抗體。于擬定時(shí)間點(diǎn)斷頭法處死小鼠取肝臟和腦組織。實(shí)驗(yàn)方法 1．免疫組化染色:取實(shí)驗(yàn)性fhf balb/c小鼠腦組織進(jìn)行aqp-4蛋白的免疫組化染色,測(cè)定od值進(jìn)行比較。 2．western blot分析:提取實(shí)驗(yàn)性fhf balb/c小鼠腦組織總蛋白,進(jìn)行western blot分析,檢測(cè)腦組織aqp-4蛋白相對(duì)含量并進(jìn)行比較。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1．a(chǎn)qp-4蛋白的免疫組化:肝衰竭組中,2小時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞

4、(ec)陽性染色明顯增強(qiáng),6和9小時(shí)可見到絕大多數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈陽性染色。ns組中,血管內(nèi)陽性染色明顯減弱,甚至看不到陽性著色。 2．balb/c小鼠腦組織.aqp-4白的半定量分析:結(jié)果表明在ns對(duì)照組中34kda.處幾乎不顯示條帶;lps組、galn組和tnfα組與ns組的表達(dá)類似,與ns組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異;在lps/galn肝衰竭組中,aqp-4蛋白的表達(dá)增強(qiáng),2h時(shí)為0.65±0.05,在6h和9h時(shí)更為明顯(分別為

5、0.74±0.06和0.87±0.07),各時(shí)間點(diǎn)較ns對(duì)照組均有顯著性差異(p<0.01);tnfαgaln肝衰竭組aqp-4蛋白的表達(dá)也增強(qiáng),分別為2h時(shí)o.73±0.07、6h時(shí)為0.83±0.08及9h時(shí)的0.91±0.06;tnfα抗體組和抗tnfα-r1抗體組表達(dá).aqp-4又明顯降低,9h時(shí)分別為0.15±0.05和0.18±0.07。 1．在fhf腦水腫形成過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞aqp-4表達(dá)明顯增加,提示fhf腦水