結(jié)核疫苗評價用豚鼠Ⅰ型過敏反應(yīng)檢測方法的建立.pdf

1、疫苗接種引起的不良反應(yīng)是疫苗安全性評價中存在的主要問題之一，其中，與免疫毒性相關(guān)的不良反應(yīng)居多，并以Ⅰ型過敏反應(yīng)最為常見和兇險。近年來，國內(nèi)外公布的與疫苗免疫毒性評價相關(guān)的指導(dǎo)原則中多以大鼠和小鼠作為Ⅰ型過敏反應(yīng)的動物模型，對其評價主要以觀察過敏體征為主。此方法主觀性強(qiáng)、難以量化和標(biāo)準(zhǔn)化，缺乏合理有效的評價模型和方法。本研究以Ⅰ型過敏反應(yīng)最敏感的豚鼠為動物模型，通過對其致敏條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，初步建立了評價Ⅰ型過敏反應(yīng)的檢測指標(biāo)及方法，客觀

2、、量化的反映了過敏反應(yīng)的發(fā)生情況，并經(jīng)乙肝疫苗和恥垢疫苗對檢測方法的有效性進(jìn)行驗證。本研究主要包括以下三個部分的實驗內(nèi)容：
　　 1.血清中過敏抗體水平的檢測：對過敏模型豚鼠的免疫方式進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，建立Ⅰ型過敏反應(yīng)豚鼠模型，通過鹽析及親和層析法，初步制備豚鼠血清過敏抗體（IgG和IgE）參考品。連續(xù)被動皮膚過敏試驗（passive cutaneous anaphylaxis，PCA）證實IgG同樣參與了豚鼠過敏反應(yīng)，并且較IgE作

3、用可能更為迅速、短暫。ELISA法檢測各疫苗免疫組IgG1水平，結(jié)果各免疫組特異性IgG1水平均較對照組明顯升高，而總IgG1水平僅OVA組較對照組有所升高。
　　 2.過敏性介質(zhì)含量檢測：通過建立支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavagefluid，BALF）、腹腔灌洗液中肥大細(xì)胞和外周血中嗜堿性粒細(xì)胞（basophilgranulocyte，Ba）的收集和分離方法，檢測各樣本中過敏性介質(zhì)如組胺和白三烯C4

4、（leucotriene C4，LTC4）的含量，結(jié)果僅OVA組過敏介質(zhì)含量較對照組明顯升高。
　　 3.細(xì)胞學(xué)檢測及其他檢測方法：瑞姬氏染色顯示OVA組中Ba和嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil granulocyte，Eo）均較對照組明顯升高。中性紅細(xì)胞染色表明OVA組豚鼠外周血中Ba所占比例較對照組顯著升高。ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)在豚鼠肺、肝和腎組織勻漿中IgE含量較多。免疫組織化學(xué)顯示IgE主要在肺小血管壁和支氣管粘膜上皮

5、細(xì)胞漿及脾髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)呈陽性表達(dá)，而在心、肝、腎組織中無特異表達(dá)。
　　 綜上所述，標(biāo)準(zhǔn)化后的Ⅰ型過敏反應(yīng)豚鼠模型在激發(fā)后能出現(xiàn)典型的過敏癥狀及病理改變，用所選取的公認(rèn)參與Ⅰ型過敏反應(yīng)的細(xì)胞和分子作為評價指標(biāo)，其水平較對照組均有明顯升高，說明能夠用所建立的指標(biāo)對疫苗Ⅰ型過敏反應(yīng)進(jìn)行客觀量化和系統(tǒng)的評價。本研究在國內(nèi)首次系統(tǒng)地用量化檢測方法對疫苗可能引起的Ⅰ型過敏反應(yīng)進(jìn)行評價，并初步制備了檢測用參考品，彌補了Ⅰ型過敏反應(yīng)缺少定量檢測