結(jié)核疫苗評(píng)價(jià)用豚鼠Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)方法的建立.pdf

1、疫苗接種引起的不良反應(yīng)是疫苗安全性評(píng)價(jià)中存在的主要問(wèn)題之一，其中，與免疫毒性相關(guān)的不良反應(yīng)居多，并以Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)最為常見和兇險(xiǎn)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外公布的與疫苗免疫毒性評(píng)價(jià)相關(guān)的指導(dǎo)原則中多以大鼠和小鼠作為Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的動(dòng)物模型，對(duì)其評(píng)價(jià)主要以觀察過(guò)敏體征為主。此方法主觀性強(qiáng)、難以量化和標(biāo)準(zhǔn)化，缺乏合理有效的評(píng)價(jià)模型和方法。本研究以Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)最敏感的豚鼠為動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)其致敏條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，初步建立了評(píng)價(jià)Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)及方法，客觀

2、、量化的反映了過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生情況，并經(jīng)乙肝疫苗和恥垢疫苗對(duì)檢測(cè)方法的有效性進(jìn)行驗(yàn)證。本研究主要包括以下三個(gè)部分的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：
　　 1.血清中過(guò)敏抗體水平的檢測(cè)：對(duì)過(guò)敏模型豚鼠的免疫方式進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，建立Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)豚鼠模型，通過(guò)鹽析及親和層析法，初步制備豚鼠血清過(guò)敏抗體（IgG和IgE）參考品。連續(xù)被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)（passive cutaneous anaphylaxis，PCA）證實(shí)IgG同樣參與了豚鼠過(guò)敏反應(yīng)，并且較IgE作

3、用可能更為迅速、短暫。ELISA法檢測(cè)各疫苗免疫組IgG1水平，結(jié)果各免疫組特異性IgG1水平均較對(duì)照組明顯升高，而總IgG1水平僅OVA組較對(duì)照組有所升高。
　　 2.過(guò)敏性介質(zhì)含量檢測(cè)：通過(guò)建立支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavagefluid，BALF）、腹腔灌洗液中肥大細(xì)胞和外周血中嗜堿性粒細(xì)胞（basophilgranulocyte，Ba）的收集和分離方法，檢測(cè)各樣本中過(guò)敏性介質(zhì)如組胺和白三烯C4

4、（leucotriene C4，LTC4）的含量，結(jié)果僅OVA組過(guò)敏介質(zhì)含量較對(duì)照組明顯升高。
　　 3.細(xì)胞學(xué)檢測(cè)及其他檢測(cè)方法：瑞姬氏染色顯示OVA組中Ba和嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil granulocyte，Eo）均較對(duì)照組明顯升高。中性紅細(xì)胞染色表明OVA組豚鼠外周血中Ba所占比例較對(duì)照組顯著升高。ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在豚鼠肺、肝和腎組織勻漿中IgE含量較多。免疫組織化學(xué)顯示IgE主要在肺小血管壁和支氣管粘膜上皮

5、細(xì)胞漿及脾髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)呈陽(yáng)性表達(dá)，而在心、肝、腎組織中無(wú)特異表達(dá)。
　　 綜上所述，標(biāo)準(zhǔn)化后的Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)豚鼠模型在激發(fā)后能出現(xiàn)典型的過(guò)敏癥狀及病理改變，用所選取的公認(rèn)參與Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的細(xì)胞和分子作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，其水平較對(duì)照組均有明顯升高，說(shuō)明能夠用所建立的指標(biāo)對(duì)疫苗Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行客觀量化和系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。本研究在國(guó)內(nèi)首次系統(tǒng)地用量化檢測(cè)方法對(duì)疫苗可能引起的Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并初步制備了檢測(cè)用參考品，彌補(bǔ)了Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)缺少定量檢測(cè)