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1、疫苗接種引起的不良反應(yīng)是疫苗安全性評(píng)價(jià)中存在的主要問(wèn)題之一,其中,與免疫毒性相關(guān)的不良反應(yīng)居多,并以Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)最為常見和兇險(xiǎn)。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外公布的與疫苗免疫毒性評(píng)價(jià)相關(guān)的指導(dǎo)原則中多以大鼠和小鼠作為Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的動(dòng)物模型,對(duì)其評(píng)價(jià)主要以觀察過(guò)敏體征為主。此方法主觀性強(qiáng)、難以量化和標(biāo)準(zhǔn)化,缺乏合理有效的評(píng)價(jià)模型和方法。本研究以Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)最敏感的豚鼠為動(dòng)物模型,通過(guò)對(duì)其致敏條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,初步建立了評(píng)價(jià)Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)及方法,客觀
2、、量化的反映了過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生情況,并經(jīng)乙肝疫苗和恥垢疫苗對(duì)檢測(cè)方法的有效性進(jìn)行驗(yàn)證。本研究主要包括以下三個(gè)部分的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:
1.血清中過(guò)敏抗體水平的檢測(cè):對(duì)過(guò)敏模型豚鼠的免疫方式進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,建立Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)豚鼠模型,通過(guò)鹽析及親和層析法,初步制備豚鼠血清過(guò)敏抗體(IgG和IgE)參考品。連續(xù)被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)證實(shí)IgG同樣參與了豚鼠過(guò)敏反應(yīng),并且較IgE作
3、用可能更為迅速、短暫。ELISA法檢測(cè)各疫苗免疫組IgG1水平,結(jié)果各免疫組特異性IgG1水平均較對(duì)照組明顯升高,而總IgG1水平僅OVA組較對(duì)照組有所升高。
2.過(guò)敏性介質(zhì)含量檢測(cè):通過(guò)建立支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid,BALF)、腹腔灌洗液中肥大細(xì)胞和外周血中嗜堿性粒細(xì)胞(basophilgranulocyte,Ba)的收集和分離方法,檢測(cè)各樣本中過(guò)敏性介質(zhì)如組胺和白三烯C4
4、(leucotriene C4,LTC4)的含量,結(jié)果僅OVA組過(guò)敏介質(zhì)含量較對(duì)照組明顯升高。
3.細(xì)胞學(xué)檢測(cè)及其他檢測(cè)方法:瑞姬氏染色顯示OVA組中Ba和嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil granulocyte,Eo)均較對(duì)照組明顯升高。中性紅細(xì)胞染色表明OVA組豚鼠外周血中Ba所占比例較對(duì)照組顯著升高。ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在豚鼠肺、肝和腎組織勻漿中IgE含量較多。免疫組織化學(xué)顯示IgE主要在肺小血管壁和支氣管粘膜上皮
5、細(xì)胞漿及脾髓質(zhì)細(xì)胞內(nèi)呈陽(yáng)性表達(dá),而在心、肝、腎組織中無(wú)特異表達(dá)。
綜上所述,標(biāo)準(zhǔn)化后的Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)豚鼠模型在激發(fā)后能出現(xiàn)典型的過(guò)敏癥狀及病理改變,用所選取的公認(rèn)參與Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的細(xì)胞和分子作為評(píng)價(jià)指標(biāo),其水平較對(duì)照組均有明顯升高,說(shuō)明能夠用所建立的指標(biāo)對(duì)疫苗Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行客觀量化和系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。本研究在國(guó)內(nèi)首次系統(tǒng)地用量化檢測(cè)方法對(duì)疫苗可能引起的Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià),并初步制備了檢測(cè)用參考品,彌補(bǔ)了Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)缺少定量檢測(cè)
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