4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯誘導NB4細胞分化及其機制研究.pdf

1、惡性腫瘤(通稱癌癥)是當前危害人類健康的重要疾病之一。誘導分化療法是腫瘤治療學的新突破，即在體內(nèi)分化誘導劑的作用下，使惡性腫瘤細胞向正?；蚪咏＜毎较蚍只孓D(zhuǎn)，從而恢復正常細胞的表型及功能。維甲類化合物是分化誘導劑的代表。本實驗室以全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)為先導化合物，對其碳鏈末端極性基團進行結構改造并對環(huán)己烯環(huán)進行結構修飾，合成了一系列全新的維甲酸類衍生物，并完成了這些化合物的純化、

2、鑒定等工作。經(jīng)藥物構效學篩選，其中4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate，ATPR)具有較強的生物學活性，有望成為一種具有自主知識產(chǎn)權的誘導分化新藥。本研究采用急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4為對象，觀察新型維甲酸類衍生物ATPR對NB4細胞的抑制增殖和誘導分化活性并探討ATPR對NB4細胞轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth facto

3、r-β1，TGF-β1)信號通路、c-myc癌基因及人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)表達的影響，部分闡明ATPR誘導NB4細胞分化的分子機制。
　　 目的：
　　 本研究觀察新型維甲酸類衍生物ATPR對急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4的抑制增殖和誘導分化活性并對其誘導分化的機制進行探討。
　　 方法：
　　 1.采用細胞計數(shù)法觀察

4、NB4細胞在不同濃度的ATPR作用下生長曲線的變化；NBT還原試驗法分析在不同濃度ATPR作用下細胞的功能分化程度；流式細胞術(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測NB4細胞表面分化抗原CD11b、CD13表達及細胞周期的變化。
　　 2.采用RT-PCR法檢測TGF-β1信號通路中TGF-β1、TGF-βⅠ型受體(TβRⅠ)、TGF-βⅡ型受體(TβRⅡ)、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7 mRNA表達的變

5、化。并通過瑞氏染色法、NBT還原試驗法及表面分化抗原的檢測觀察TβRⅠ特異性抑制劑SB431542對ATPR誘導分化作用的影響。
　　 3.采用RT-PCR、Western Blot技術檢測ATPR引起的NB4細胞中c-myc、hTERT mRNA及蛋白表達的變化。
　　 結果：
　　 1.ATPR能抑制NB4細胞的增殖，并呈濃度及時間依賴性。ATPR誘導分化活性表現(xiàn)為NBT陽性細胞率增加；NB4細胞表面分化抗原

6、CD11b表達增加，而CD13表達減少。細胞周期檢測顯示ATPR作用后G0/G1期細胞比例上升，S期細胞比例下降，呈G1期阻滯。
　　 2.ATPR作用于NB4細胞后，TGF-β1信號通路中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、Smad3 mRNA表達量在24h時均無明顯改變，自2d或3d開始上升，至4d或5d達峰值；Smad4 mRNA表達量從4d開始增加，在5d時達峰值；而Smad7 mRNA表達量于5d才開始出現(xiàn)增

7、加的趨勢。TβRⅠ特異性抑制劑SB431542 可明顯抑制ATPR對NB4細胞形態(tài)學、NBT陽性細胞百分比、CD11b及CD13表達量的影響。
　　 3.ATPR作用后，NB4細胞中c-myc、hTERT mRNA及蛋白表達量明顯減少，并呈時間依賴關系。
　　 結論：
　　 1.ATPR對NB4細胞有較強的增殖抑制及誘導分化活性，進一步對其抗腫瘤機制進行深入研究，將有助于開發(fā)新的有效的抗癌藥物，以改善癌癥的預后，