異甘草酸鎂對(duì)肝細(xì)胞模擬缺血再灌注損傷的保護(hù)作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　觀察異甘草酸鎂(Magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)對(duì)肝細(xì)胞模擬缺血再灌注后細(xì)胞增殖、凋亡、炎癥的調(diào)控作用,探討 MgIG對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制,為將來(lái) MgIG在肝臟缺血再灌注損傷中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人肝細(xì)胞株 HL-7702,當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí):
　　1.將細(xì)胞接種至96孔板,隨機(jī)分為缺血再灌注組(isch

2、emia- reperfusion group,IR組)及 MgIG預(yù)處理組,待細(xì)胞貼壁后分別用不同濃度(0、10-2、10-1、1、10、100mg/ml)的MgIG預(yù)處理細(xì)胞24h,模擬缺血6h、再灌注4h后應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè) MgIG對(duì)缺血再灌注肝細(xì)胞增殖活力的影響;
　　2.將 HL-7702細(xì)胞接種至培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶或載玻片上,隨機(jī)將細(xì)胞分為 IR組、低濃度組、中濃度組、高濃度組,待細(xì)胞貼壁后,分別用含有不

3、同濃度的 MgIG(0、0.1、1、10mg/ml)預(yù)處理24h,模擬缺血6h、再灌注4h后,取細(xì)胞或細(xì)胞的上清液用作以下實(shí)驗(yàn):
　?、賾?yīng)用吖啶橙/嗅化乙啶(AO/EB)染色觀察細(xì)胞的凋亡情況;
　?、谟孟鄳?yīng)的試劑盒分別檢測(cè)各組培養(yǎng)液中 ALT、SOD、MDA、IL-1β、TNF-α的水平;
　?、蹜?yīng)用RT-qPCR法檢測(cè)各組 bcl-2、Bax、NF-ΚB基因 mRNA的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.MT

4、T法結(jié)果表明:與 IR組(0.227±0.013)相比,MgIG在0.1-10mg/mL濃度范圍內(nèi)能提高缺血再灌注 HL-7702細(xì)胞的 A值(0.285±0.017、0.320±0.008、0.341±0.019),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);濃度過(guò)低時(shí)(0.01mg/ml),與IR組(0.227±0.013)相比,雖然也能提高缺血再灌注 HL-7702細(xì)胞的 A值(0.235±0.014),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);

5、濃度過(guò)高時(shí)(100 mg/ml),觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部漂浮,無(wú)活細(xì)胞;
　　2.AO/EB染色結(jié)果顯示,低濃度組細(xì)胞凋亡率(0.5763±0.0405)低于 IR組(0.7124±0.0581),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),中、高濃度組細(xì)胞凋亡率(0.2866±0.0619、0.1261±0.0439)分別低于 IR組(0.7124±0.0581),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　3.低、中、高濃度組上清液 A

6、LT含量(21.27±1.58、17.03±0.87、14.79±1.54u/L)分別低于 IR組(24.65±1.22u/L),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　4.低、中、高濃度組 SOD含量(16.99±1.25、20.22±1.35、23.76±0.99u/mL)分別高于 IR組(12.52±1.80u/mL),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　5.低、中、高濃度組 MDA含量(9.84±1.14、5

7、.64±0.87、3.93±0.59nmol/mL)分別低于 IR組(11.89±0.82nmol/mL),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　6.低、中、高濃度組 IL-1β含量(33.34±1.30、30.51±0.76、28.35±1.24pg/ml)、TNF-α含量(58.75±4.05、40.04±4.74、29.22±2.31pg/ml)分別低于 IR組(37.07±1.18pg/ml)、(66.43±3.28p

8、g/ml),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
　　7.RT-qPCR結(jié)果顯示低、中、高濃度組 bcl-2基因 mRNA的表達(dá)量(3.350±0.151、9.279±0.350、15.290±0.756)分別高于 IR組(0.928±0.068),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),低、中、高濃度組 Bax、NF-ΚB基因 mRNA的表達(dá)量(0.743±0.035、0.265±0.065、0.119±0.019)、(0.597±