肺癌中IGF-Ⅱ蛋白表達與HPV感染的相關性研究及Igf2基因的印跡狀態(tài)分析.pdf

1、目的： 1．探討HPV感染在肺癌發(fā)生中的病因?qū)W意義，并分析HPV感染與臨床病理特征的關系； 2．研究IGF-II蛋白過表達與肺癌發(fā)生、發(fā)展的相關性，及其與臨床病理特征的關系； 3．初步分析肺癌中HPV感染與IGF-II蛋白表達的相關性； 4．檢測肺癌中Igf2基因的印跡狀態(tài)，并分析其印跡缺失的意義。 方法： 1．免疫組化SP法檢測高危廣譜型HPV-E6/E7原癌蛋白與IGF-II蛋白分別在

2、68例肺癌和12例肺良性病變組織中的表達情況； 2．分別采用PCR-RFLP和RT-PCR-RFLP方法檢測64例肺癌和24例肺良性病變中Igf2基因的印跡狀態(tài)。 結(jié)果： 1．68例肺癌和12例肺良性病變中HPV感染和IGF-II蛋白表達的結(jié)果采用免疫組化SP法檢測高危廣譜型HPV E6/E7原癌蛋白，并參照本實驗組已有的PCR方法對HPV 16/18亞型的檢測，以兩種檢測結(jié)果均為陽性定義為本實驗的HPV感染陽性

3、,從而提高高危型HPV 16/18檢測的準確性。其結(jié)果顯示，肺癌組織中HPV陽性檢出率為44.1％（30/68）；而肺良性病變組織中，HPV陽性檢出率只有8.3％（1/12），二者差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 肺癌組織中IGF-II蛋白表達程度較強，其陰性、陽性和強陽性表達率分別為10.3％（7/68）、36.8％（25/68）和52.9％（36/68）；肺良性病變組織中IGF-II蛋白陰性、陽性和強陽性表達率依次為75

4、％（9/12）、16.7％（2/12）和8.3％（1/12），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 2．68例肺癌中HPV陽性組和HPV陰性組的IGF-II蛋白表達情況HPV陽性組中IGF-II蛋白表達程度較高，其陰性、陽性和強陽性表達率分別為3.3％（1/30）、30.0％（9/30）和66.7％（20/30）；而HPV陰性組中IGF-II蛋白表達率依次為15.8％（6/38）、42.1％（16/38）和42.1％（16/38

5、），二者有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。 3．68例肺癌中HPV感染、IGF-II蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關系HPV感染和IGF-II蛋白表達均與腫瘤分化程度具有統(tǒng)計學差異。HPV感染率在低分化組中為64.3％（18/28），明顯高于在中分化組中的33.3％（9/27）和高分化組中的23.1％（3/13），三組間具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。IGF-II蛋白的陰性、陽性和強陽性表達率在低分化組中依次為10.7％（3/28）、17

6、.9％（5/28）和71.4％（20/28）；在中分化組中依次為7.4％（2/27）、40.7％（11/27）和51.9％（14/27）；在高分化組中依次為15.4％（2/13）、69.2％（9/13）和15.4％（2/13），并以低分化組中IGF-II蛋白表達程度最強，三組差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。IGF-II蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的強陽性表達率為64.3％（27/42）；在非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的強陽性表達率為34.6％（9/26

7、），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示IGF-II蛋白的高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關。 IGF-II蛋白的陰性、陽性和強陽性表達率在臨床I期中為12.5％（2/16）、62.5％（10/16）和25.0％（4/16）；在臨床II期中則為13.3％（2/15）、46.7％（7/15）和40.0％（6/15）；而以III～IV期中IGF-II蛋白表達程度最強，其陰性、陽性和強陽性表達率為8.1％（3/37）、21.6％（8/37）和

8、70.3％（26/37），經(jīng)統(tǒng)計學分析，IGF-II蛋白表達與臨床分期具有相關性（P<0.05）。 4．RFLP法鑒定印跡基因Igf2的印跡狀態(tài)采用PCR-RFLP方法對Igf2基因第9外顯子（E9）Apa I酶切位點的多態(tài)性進行鑒定，篩選出具有轉(zhuǎn)錄多態(tài)性位點的雜合子。結(jié)果顯示，肺癌組中雜合子占48.4％（31/64），肺良性病變組中雜合子占37.5％（9/24）。繼續(xù)采用RT-PCR-RFLP方法檢測并分析Igf2雜合子的基因

9、印跡狀態(tài)。結(jié)果顯示，肺癌雜合子中77.4％（24/31）出現(xiàn)了印跡缺失（LOI，雙等位基因表達），22.6％（7/31）為正常印跡（單等位基因表達）者；肺良性病變雜合子中66.7％（6/9）發(fā)生了LOI，33.3％（3/9）存在正常印跡。二者間差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.430，P=0.512）。 在31例肺癌雜合子的配對組織中，肺癌組織有77.4％（24/31）發(fā)生了LOI；癌旁2cm肺組織中61.3％（19/31）發(fā)生了LO

10、I；而離腫塊最遠端肺組織只有29.0％（9/31）出現(xiàn)LOI，三組間Igf2基因的LOI具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。并且，肺癌組織和癌旁2cm組織分別與離腫塊最遠端肺組織之間的LOI存在統(tǒng)計學差異（P<0.05），而肺癌組織和癌旁2cm組織間差異并無統(tǒng)計學意義（χ2=1.897，P=0.168）。 結(jié)論： 1．肺癌中高危型HPV16/18感染率顯著高于良性對照組，并且HPV感染與肺癌分化程度相關，提示高危型HPV感染

11、在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮一定的作用。 2．肺癌中IGF-II蛋白的表達程度較之良性對照組明顯增強，與肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度和臨床分期相關。IGF-II是一個重要的促有絲分裂原,提示其過表達可能導致細胞的惡性轉(zhuǎn)化，并易發(fā)生淋巴管上皮細胞增殖，促使肺癌易通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，表明IGF-II在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。 3．肺癌中IGF-II蛋白表達與HPV感染相關，HPV-E6/E7原癌蛋白的存在可能通過