吉富羅非魚IGF2基因分離及其多態(tài)性與魚體型、增重相關性研究.pdf

1、胰島素樣生長因子2(Insulin-like growth factor2, IGF2)是控制動物生長和脂肪沉積的重要基因之一。本文分離了吉富羅非魚(Genetic Improved FarmedTilapia， GIFT)IGF2基因6746 bp，包含有4個外顯子和3個內含子，開放閱讀框為669 bp，編碼222個氨基酸，5’非翻譯區(qū)379 bp,3’非翻譯區(qū)892 bp。氨基酸同源性比較表明，與魚類同源性為64.1％-98.6％，

2、與哺乳動物同源性為59.9％-63.2％。
　　 通過比對吉富羅非魚10個體IGF2基因序列，以同一位點不同堿基出現的比例大于3/7，確定潛在的多態(tài)位點，結果共尋找到12處多態(tài)位點，其中11處為SNPs位點，1處為微衛(wèi)星位點。本文建立了檢測內含子1621nt C/T、外顯子287nt T/G、外顯子3161nt A/G和內含子3微衛(wèi)星位點共4個位點基因型的方法，調查了192尾吉富羅非魚的基因型，并分析不同基因型與體型、增重的相關

3、性。使用四引物擴增受阻體系PCR(tetra-primer PCR method and the amplificationrefractory mutation system, Tetra-primers ARMS)檢測內含子1621nt基因型，結果顯示，CC、CT、TT基因型頻率在雄魚中分別為0.32、0.32、0.36，在雌魚中分別為0.38、0.38、0.24;與體型、增重的相關性分析表明，此位點不同基因型只與雄魚體型（體高/體

4、長）顯著相關(p＜0.05), CC型個體顯著高于CT和TT型個體。外顯子287nt T/G顛換導致了HinfⅠ酶切位點改變，使用PCR-RFLP法檢測該位點基因型，結果顯示整個試驗群體中不存在GG基因型，雄魚中，TT和TG基因型頻率分別為0.33和0.67，而雌魚群體中則為0.56和0.44;與體型、增重的相關性分析表明，此位點與雄魚體型（體高/體長）顯著相關(p＜0.05)， TT型個體體高/體長值顯著高于TG型個體。外顯子3A/G

5、轉換導致了MspⅠ酶切位點改變，使用PCR-RFLP法檢測該位點基因型，結果顯示整個群體中不存在AA基因型，在雄魚中，GG、AG基因型頻率分別為0.71、0.29，而雌魚中則為0.75和0.25;與體型、增重的相關性分析表明，此位點不同基因型只與雄魚增重極顯著相關(p＜0.01), GG型的雄魚明顯較AG型增重快。使用PAGE電泳區(qū)分內含子3微衛(wèi)星位點的不同等位基因，結果共有5種等位基因，13種基因型，雄魚群體中，基因型頻率為0-0.2