肺癌A549和H446細胞系腫瘤始發(fā)細胞的實驗研究.pdf

1、目的：該實驗主要是通過克隆形成能力和致瘤能力兩方面來研究非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）A549細胞系和小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）H446細胞系中腫瘤始發(fā)細胞的比例。 方法：采用有限稀釋法將A549和H446細胞稀釋至10個/ml，100ul/孔種96孔板，1周后顯微鏡下檢測細胞單克隆形成的數(shù)量及大小。將單克隆傳代，以觀察細胞自我更新能力；

2、隨機取6個大克隆傳代，細胞增殖至106時，測其生長曲線，檢測其增殖能力；收集來自于1個細胞形成的克隆細胞種于BALB/C裸鼠皮下，觀察其致瘤能力。以CD133為分子標記，使用免疫磁珠細胞分選技術(shù)分選細胞，測定CD133+細胞和CD133-細胞的克隆形成能力。測定Hoechst33342染色是否會影響非SP細胞的增殖能力和單克隆形成能力。 結(jié)果：A549和H446細胞均能形成3種類型的克隆：大克?。ǘ嘤?00個細胞），中克隆（50

3、-100個細胞）和小克?。ㄉ儆?0個細胞）?？寺〖毎麄鞔?，來源于小克隆的細胞不能形成新的克隆，在第2代就凋亡；來源于中克隆的細胞在第2代主要形成小克隆，只形成數(shù)量很少的中克隆，在第4代均凋亡；而來源于大克隆的細胞總是形成3種類型的克隆，即使是第10代。 45％以上的細胞能夠形成大克隆，大克隆傳代后又能形成新的克隆；來源于1個大克隆的細胞種植到BALB/C裸鼠身上，10天左右就能形成肉眼可見的腫瘤。 磁分選后CD133+

4、細胞和CD133-細胞克隆形成能力及致瘤能力相同；臺盼蘭染色顯示Hoechst33342染色能夠明顯影響細胞活性，種96孔板后細胞的克隆形成能力和增殖能力明顯降低（p<0．05）。 細胞周期顯示，A549細胞系中G1、G2和S期細胞分別占43．39％、13．65％和42．96％；H446細胞系中G1、G2和S期細胞分別占62．75％、13．29％和23．96％。A549中能形成大克隆的單個細胞擴增至106需要的時間19～26天，