ART1對應(yīng)力纖維的影響在小鼠結(jié)腸癌CT26細胞黏附和運動能力中的作用.pdf

1、目的:初步探討單腺苷二磷酸核糖基化轉(zhuǎn)移酶-1(mono(ADP-ribosyl)transferase-1，ART1）基因沉默與過表達對小鼠結(jié)腸癌CT26應(yīng)力纖維的影響在該細胞黏附和運動能力中的作用及其可能的機制。
　　方法:以攜帶ART1-shRNA與ART1基因過表達的重組慢病毒分別感染小鼠結(jié)腸癌CT26細胞;以未感染CT26細胞組(未處理組(Untreated))、感染慢病毒空載體的細胞(陰性對照組(NC-shRNA))為對

2、照，感染攜帶ART1-shRNA慢病毒的細胞（基因沉默組(ART1-shRNA)）、感染ART1基因過表達慢病毒的細胞(過表達組(ART1-overexpression))為實驗組，;RT-PCR檢測CT26細胞ART1 mRNA表達變化;激光共聚焦觀察微絲形態(tài)變化;通過黏附、遷移和侵襲實驗觀察ART1-shRNA和ART1過表達對CT26細胞基質(zhì)黏附、運動和侵襲能力的影響。小鼠脾臟包膜下接種各組細胞，構(gòu)建BALB/c小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模

3、型并相應(yīng)分組，比較各組小鼠脾臟移植瘤大小、肝臟轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)和荷瘤小鼠生存時間差異;采用Western blot檢測ART1，RhoA，integrinβ1，F(xiàn)AK在各組CT26細胞及脾臟移植瘤組織中的表達情況。
　　結(jié)果:1、成功獲得ART1-shRNA，ART1-overexpression，NC-shRNA細胞株，RT-PCR和WB結(jié)果顯示:ART1-shRNA組的ART1mRNA和ART1蛋白比Untreated組和NC-s

4、hRNA組表達顯著降低(P＜0.05)，ART1-overexpression組的ART1 mRNA和ART1蛋白比Untreated組和NC-shRNA組表達顯著增高(P＜0.05)，而Untreated組較NC-shRNA組ART1mRNA和ART1蛋白的表達無明顯差異(P＞0.05)
　　2、激光共聚焦顯示:與Untreated組比較，ART1-shRNA組細胞應(yīng)力纖維形成明顯減少(P＜0.05)，ART1-overexpr

5、ession組應(yīng)力纖維形成明顯增加(P＜0.05);細胞黏附實驗，遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示:ART1-shRNA組細胞的黏附、遷移和侵襲能力較Untreated組和NC-shRNA組明顯減弱(P＜0.05)，ART1-overexpression較Untreated組和NC-shRNA組明顯增強(P＜0.05)，Untreated組與NC-shRNA組無明顯差異(P＞0.05)。
　　3、成功構(gòu)建小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，各組小鼠脾臟均

6、有移植瘤形成，ART1-shRNA組移植瘤的體積、重量和肝臟轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)較Untreated組和NC-shRNA組明顯減小(P＜0.05)，ART1-overexpression組移植瘤的體積、重量和肝臟轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)數(shù)較Untreated組和NC-shRNA組明顯增加(P＜0.05)，但Untreated組與NC-shRNA組無明顯差異(P＞0.05)。Kaplan-Meier生存曲線顯示接種ART1-shRNA組 CT26細胞的荷瘤小鼠

7、生存時間明顯延長(P＜0.05)、接種ART1-overexpression組CT26細胞的荷瘤小鼠生存時間明顯縮短(P＜0.05)，而Untreated組與NC-shRNA組無明顯差異(P＞0.05)。
　　4、WB結(jié)果提示:ART1-shRNA組脾臟移植瘤組織中ART1蛋白表達明顯低于Untreated組(P＜0.05)，ART1-overexpression組脾臟移植瘤組織中ART1蛋白表達明顯高于Untreated組(P＜

8、0.05)，Untreated組與NC-shRNA組無明顯差異(P＞0.05)。ART1-shRNA組細胞和脾臟移植瘤組織中RhoA，integrinβ1，F(xiàn)AK蛋白表達量明顯低于Untreated組(P＜0.05)，ART1-overexpression組細胞和脾臟移植瘤組織中RhoA，integrinβ1，F(xiàn)AK蛋白表達量明顯高于Untreated組(P＜0.05)，Untreated組與NC-shRNA組無明顯差異(P＞0.05)