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文檔簡介
1、目的:顱內(nèi)腫瘤占全身腫瘤的2%,年發(fā)病率1/萬,膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤。近年來外科手術(shù)、放療、化療等綜合治療已廣泛應(yīng)用于膠質(zhì)瘤的治療,使病人在一定程度上得到暫時(shí)緩解,但復(fù)發(fā)率高、預(yù)后未能根本改善,尤其是高度惡性膠質(zhì)瘤。其原因之一就是膠質(zhì)瘤的生物學(xué)行為極為復(fù)雜,臨床神經(jīng)外科對(duì)其還缺乏足夠的認(rèn)識(shí),是目前膠質(zhì)瘤研究的難題。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展及其在腫瘤學(xué)研究中的應(yīng)用,人們已認(rèn)識(shí)到腫瘤的發(fā)生是原癌基因的激活和抑癌基因的突變、失活所致。近年
2、研究表明,連接蛋白基因在許多腫瘤中表達(dá)明顯受到抑制,以Cx基因作為基本結(jié)構(gòu)和功能單位的間隙連接所介導(dǎo)的細(xì)胞間隙連接通訊(GJIC)中斷,因此,Cx基因和GJIC可能在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。 Cx是一個(gè)多基因家族編碼的蛋白質(zhì),目前發(fā)現(xiàn)有13個(gè)成員。鑒于Cx基因表達(dá)的組織特異性,在成人腦組織中主要表達(dá)Cx43及Cx32,其中星形細(xì)胞表達(dá)Cx43,少支膠質(zhì)細(xì)胞及某些神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)Cx32。有關(guān)Cx43基因在膠質(zhì)瘤中的表達(dá),
3、目前國外僅有小宗腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本及膠質(zhì)瘤體外細(xì)胞系的研究,尚無Cx43基因表達(dá)與膠質(zhì)瘤病理類型、增殖活性、生物學(xué)行為等方面的研究報(bào)道,國內(nèi)則未見報(bào)道。 增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)是近年來用以觀察細(xì)胞增殖活性的一個(gè)重要指標(biāo),它是一種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白,其表達(dá)水平反映細(xì)胞增殖率及DNA合成率,是目前腫瘤增殖活動(dòng)研究中可靠的增殖期標(biāo)志物。在本實(shí)驗(yàn)中,我們通過檢測Cx43mRNA及其蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá),同時(shí)用PCNA作細(xì)胞增殖指標(biāo),分析Cx
4、43基因表達(dá)與膠質(zhì)瘤和增殖的關(guān)系,探討Cx43基因的表達(dá)與膠質(zhì)瘤發(fā)生機(jī)制及在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,為膠質(zhì)瘤惡性程度、術(shù)后的治療以及療效觀察提供客觀的依據(jù)。 方法:研究對(duì)象為手術(shù)切除且保存完好的膠質(zhì)瘤組織的石蠟包埋標(biāo)本47例,所有膠質(zhì)瘤標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性膠質(zhì)瘤,并用10例正常腦組織標(biāo)本作為對(duì)照(均取于內(nèi)減壓術(shù))。采用免疫組化及原位雜交技術(shù)檢測CX43基因的表達(dá),SP免疫組化技術(shù)檢測增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的蛋白表達(dá)。
5、 結(jié)果: 1、Cx43mRNA在正常腦組織、膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)陽性率分別為100%、61.7%,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間有顯著差異(P<0.01)。低惡度膠質(zhì)瘤組織(Ⅰ/Ⅱ)中Cx43表達(dá)率分別為100.0%、93.8%;高惡度膠質(zhì)瘤(Ⅲ/Ⅳ)Cx43表達(dá)率分別為33.3%、16.7%,Cx43mRNA表達(dá)率與膠質(zhì)瘤分級(jí)呈負(fù)相關(guān),且低惡度腫瘤與高惡度腫瘤有顯著差異(P<0.05)。 2、Cx43蛋白在正常腦組織及不同級(jí)別膠質(zhì)
6、瘤中的表達(dá)結(jié)果與Cx43mRNA相近,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間有顯著差異(P<0.01),隨著膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)升高Cx43蛋白表達(dá)呈下降趨勢(P<0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、PCNA在正常腦組織中均表達(dá)陰性,而在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)陽性率為76.6%,兩組之間有顯著差異(P<0.01)。在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中表達(dá)強(qiáng)弱依次為Ⅳ級(jí)100.0%、Ⅲ級(jí)94.4%、Ⅱ級(jí)62.5%和I級(jí)42.9%;PCNA表達(dá)率與膠質(zhì)瘤分級(jí)呈正相關(guān)(P<0.05)
7、,且Ⅲ/IV級(jí)與Ⅰ/Ⅱ級(jí)之間有明顯差異。 4、Cx43tuRNA,Cx43蛋白,PCNA在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)顯示:Cx43表達(dá)結(jié)果與Cx43mRNA的表達(dá)結(jié)果之間呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。而隨著Cx43mRNA及其蛋白表達(dá)強(qiáng)度逐漸下降,PCNA則呈上升趨勢,統(tǒng)計(jì)分析表明Cx43mRNA及其蛋白與PCNA在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)。 結(jié)論: 1、人腦膠質(zhì)瘤中Cx43 mRNA表達(dá)與膠質(zhì)瘤分級(jí)呈負(fù)相關(guān),膠
8、質(zhì)瘤惡性程度越高,Cx43 mRNA表達(dá)越低或缺失。 2、人腦膠質(zhì)瘤中Cx43蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤的分級(jí)呈負(fù)相關(guān);與Cx43 mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)。隨腫瘤惡性程度增加,Cx43 mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸下降,Cx43在組織中的含量降低,導(dǎo)致Cx43表達(dá)水平相應(yīng)降低。 3、人腦膠質(zhì)瘤中較正常腦組織PCNA表達(dá)明顯增高,且隨著膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)的提高,PCNA表達(dá)有升高趨勢,PCNA與膠質(zhì)瘤的惡性增殖有密切聯(lián)系。 4、人腦
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