三氧化二砷藥物洗脫支架預防血管PTA術(shù)后再狹窄的實驗研究.pdf

1、第一部分 三氧化二砷誘導犬動脈平滑肌細胞凋亡的體外實驗研究 目的明確三氧化二砷誘導犬平滑肌細胞凋亡的作用，進一步探討三氧化二砷體外誘導犬動脈平滑肌細胞凋亡的最佳有效濃度。 材料和方法 1．體外原代培養(yǎng)犬動脈平滑肌細胞。 2．眥染色光學顯微鏡觀察及α一平滑肌肌動蛋白免疫組化染色鑒定平滑肌細胞。 3．MTT法觀察不同濃度三氧化二砷對平滑肌細胞增殖的抑制作用。 4．繪制不同濃度三氧化二砷

2、對平滑肌細胞增殖的生長抑制曲線。 5．透射電鏡觀察三氧化二砷誘導平滑肌細胞凋亡超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果體外實驗表明 1．在三氧化二砷作用下平滑肌細胞生長受到抑制，抑制作用隨濃度的提高和時間的延長而更加明顯。 2．平滑肌細胞隨三氧化二砷濃度增加，細胞凋亡明顯，細胞增殖速度明顯降低，存活細胞數(shù)減少。 3．透射電鏡發(fā)現(xiàn)：凋亡平滑肌細胞的形態(tài)學變化，平滑肌細胞呈橢圓或不規(guī)則型，帶有長的胞質(zhì)突起，細胞表面有少

3、量短小的微絨毛，細胞核偏于細胞的一端，核仁明顯，胞質(zhì)內(nèi)有大的空泡狀結(jié)構(gòu)，為線粒體空泡變和脂滴空泡，細胞核染色質(zhì)溶解，密斑密體形成高電子密度的顆粒，肌絲溶解，線粒體腫大空泡變性，細胞基質(zhì)電子密度低下，少量細胞質(zhì)膜脫落，形成凋亡小體。 結(jié)論 1．三氧化二砷對犬髂動脈平滑肌細胞增殖有明顯抑制作用：作用機制為誘導平滑肌細胞發(fā)生凋亡，從而遏止再狹窄的發(fā)生。 2．三氧化二砷使犬動脈平滑肌細胞的DNA合成和分裂的細胞逐漸減少，

4、靜止期和凋亡期的細胞逐漸增多，使細胞增殖阻滯于DNA合成期和DNA合成后期，減少平滑肌的增殖。 3．三氧化二砷誘導平滑肌細胞凋亡最低有效濃度為2．Oumol／L，4．Oumol／L三氧化二砷對血管平滑肌細胞有明顯促凋亡作用，5．Oumol／L三氧化二砷有明顯促血管平滑肌細胞死亡作用，上述作用有濃度及時間依賴性。 綜上所述，三氧化二砷對再狹窄形成的主要原因平滑肌細胞過度增殖、有明確的抑制作用，使細胞的增殖與凋亡重新達到平衡

5、，為三氧化二砷洗脫支架的動物實驗提供重要實驗室依據(jù)。 第二部分 三氧化二砷藥物洗脫支架的制作 目的制作丙交酯一嗎啉二酮聚合物涂層材料，利用涂層制作三氧化二砷藥物洗脫支架，測量支架涂層質(zhì)量及藥物載藥量。 材料與方法 1．自行合成丙交酯一嗎啉二酮聚合物涂層材料。 2．制作三氧化二砷、雷帕霉素及無藥洗脫支架。 3．測量三氧化二砷、雷帕霉素洗脫支架的涂層和藥物載藥量，測量無藥洗脫支

6、架的涂層質(zhì)量。 結(jié)果 1．合成獲得丙交酯一嗎啉二酮聚合物涂層材料。 2．制作三氧化二砷洗脫支架12個，涂層平均質(zhì)量186ug，平均載藥量46．58ug：雷帕霉素支架6個，涂層質(zhì)量178．5ug，載藥量402．7ug：無藥洗脫支架6個，涂層質(zhì)量187．7ug。 結(jié)論 1．成功合成丙交酯一嗎啉二酮聚合物涂層材料。 2．制成三氧化二砷藥物洗脫支架及無藥洗脫支架。 第三部分

7、 三氧化．--．砷藥物洗脫支架預防PTA術(shù)后再狹窄的動物實驗研究目的通過動物實驗，評價三氧化二砷藥物洗脫支架預防PTA術(shù)后再狹窄的效果。以驗證課題設想：1．三氧化二砷洗脫支架能否預防PTA術(shù)后再狹窄的發(fā)生；2．三氧化二砷洗脫支架與雷帕霉素洗脫支架預防PTA術(shù)后再狹窄療效有無不同。材料與方法將12條犬的24條髂動脈血管行球囊擴張術(shù)后，植入支架。支架分組情況如下：鎳鈦合金編織無藥洗脫支架6枚，雷帕霉素洗脫支架6枚，三氧化二砷洗脫支架12枚。

8、分別于術(shù)后4，12周各組抽取一定數(shù)支架血管，DSA造影觀察通暢情況及內(nèi)支架再狹窄情況，隨后處死實驗犬，取出支架所在段血管，切片HE染色顯微鏡觀察。評價：血管造影支架血管段是否狹窄及程度，支架血管壁的慢性排斥反應，支架的內(nèi)膜覆蓋情況，定量分析新生內(nèi)膜增生程度。結(jié)果支架血管造影表現(xiàn)：4周，三氧化二砷洗脫支架組，無藥洗脫支架組，雷帕霉素支架組三組支架均未發(fā)生再狹窄，血管通暢。12周，無藥洗脫支架組可見明顯再狹窄，雷帕霉素及三氧化二砷洗脫支架組

9、可見輕微狹窄，與無藥洗脫支架組有顯著性差異(P<0．05)；病理切片示，12周時，三氧化-fi申及雷帕霉素洗脫支架組可見輕度血管新生內(nèi)膜增生，無藥洗脫支架組新生血管內(nèi)膜明顯增生。增生血管內(nèi)膜厚度及面積，三氧化二砷與雷帕霉素組之間無顯著性差異，三氧化二砷及雷帕霉素組與無藥洗脫支架組之間，增生血管內(nèi)膜厚度及面積有顯著性差異。 結(jié)論 1．球囊擴張犬髂動脈后植入三氧化二砷支架的實驗方法是安全可行的。 2．三氧化二砷支架，