雙基因共表達(dá)預(yù)防血管再狹窄的實驗研究.pdf

1、冠心病的致死致殘率很高,在中國其發(fā)病率呈逐年上升趨勢.該研究采用雙基因共表達(dá)策略,分別以細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子P21基因和反義凝血酶受體基因（ATR）,及P21和細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-4（TIMP-4）基因配合,擬從抑制血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增生、遷移入手,探討雙基因共表達(dá)預(yù)防再狹窄的新途徑.一、攜帶p21和ATR單、雙基因的AAV載體的構(gòu)建與包裝.目的：構(gòu)建、包裝攜帶p21和ATR單、雙基因的重組腺病毒伴隨病毒載體（rAA

2、V）,為進(jìn)一步的體內(nèi)、外功能實驗提供基礎(chǔ).結(jié)論：1.AAV載體質(zhì)粒pSNAV可將其所攜帶的基因轉(zhuǎn)入BHK細(xì)胞,并嵌合入BHK細(xì)胞的基因組DNA,用于rAAV包裝.2.綠色熒光蛋白基因可以在BHK/GFP細(xì)胞中充分表達(dá).3.HSV1-rc/△UL2包裝系統(tǒng)可以包裝出大于1×10<'11～14>particles/ml的高滴度rAAV病毒.二、p21和ATR雙基因共表達(dá)對人主動脈平滑肌細(xì)胞的影響.目的：觀察p21和ATR雙基因共表達(dá)對人主動

3、脈平滑肌細(xì)胞（ASMC）增殖和凋亡的影響.結(jié)論：上述結(jié)果提示ATR和p21雙基因?qū)雽θ似交〖?xì)胞增殖的抑制及促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用均強(qiáng)于p21或ATR單基因?qū)?三、p21和ATR雙基因共表達(dá)對大鼠頸總動脈損傷的影響.目的：觀察p21和ATR雙基因共表達(dá)對球囊拉傷血管新生內(nèi)膜形成的抑制作用.結(jié)論：（1）在體內(nèi)rAAV/AP可以感染血管中膜平滑肌細(xì)胞,并將其所攜帶的p21和ATR雙基因轉(zhuǎn)入所感染的細(xì)胞.（2）p21和ATR在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中獲得

4、了穩(wěn)定的表達(dá).（3）p21和ATR共表達(dá)可抑制損傷血管中膜平滑肌細(xì)胞的增殖及新生內(nèi)膜的形成.四、攜帶TIMP4和p21單、雙基因的腺病毒載體的構(gòu)建與包裝.目的：構(gòu)建并包裝攜帶TIMP4和p21單、雙基因的腺病毒載體,為進(jìn)一步的體內(nèi)、外功能實驗提供基礎(chǔ).結(jié)論：（1）成功的構(gòu)建了攜帶TIMP-4和p21單、雙基因的穿梭載體;pTrack-T4、pTrack-p21、和pTrack-T4-p2.（2）采用在大腸桿菌BJ5183中進(jìn)行同源重組的