應力刺激下Wnt-β-catenin信號通路對成牙骨質細胞成骨效應的調控.pdf

1、正畸矯治力作用下，牙槽骨內(nèi)壓力側的牙周膜壓縮，張力側的牙周膜拉伸，引發(fā)了牙周組織一系列分子生物學改變，最終導致壓力側骨吸收和張力側骨形成，牙移動由此發(fā)生。牙齒在這一過程中承受相同的作用力，伴隨牙周組織的改建，在牙齒移動的過程中，牙根因為受力也會發(fā)生一定程度的吸收及修復。位于牙骨質與牙周膜之間的成牙骨質細胞在牙根吸收后修復的過程中發(fā)揮著重要的作用，它的功能主要是形成牙骨質。研究成牙骨質細胞的生物學功能，探索成牙骨質細胞對牙根吸收后修復的機

2、制是有必要的。經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路是一條力學相關通路，現(xiàn)有研究已經(jīng)證實力學刺激能夠激活成骨細胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號轉導通路，促進成骨細胞發(fā)揮成骨效應。成牙骨質細胞與成骨細胞在功能上具有極大的相識性，而力學刺激下經(jīng)典Wnt信號通路對成牙骨質細胞成骨效應的調控作用，目前國內(nèi)外對這方面的研究還沒有，本課題主要是通過張應力刺激以及細胞信號通路的特異性阻斷劑干預，以Runx2為切入點，采用實時熒光定量PCR、Western免疫印跡等

3、方法，研究應力刺激對成牙骨質樣細胞中Wnt信號通路的激活效應以及該通路對成骨因子Runx2的調控作用。對正畸力作用下成牙骨質細胞的生物學改變機制及促進牙根吸收修復的關系進行了探討，為進一步研究正畸矯治中牙根吸收后修復的分子生物學理論提供依據(jù)。
　　實驗分為四個部分:
　　1.應力刺激對成牙骨質細胞內(nèi)RUNX2的調控作用目的:探索應力刺激對成牙骨質細胞內(nèi)Runx2的調控作用。方法:應用FX4000T應力加載裝置對成牙骨質細胞株

4、OCCM30分別加載張應力0h、3h、6h、12h，RT-PCR檢測Runx2mRNA表達水平。結果:RT-PCR結果顯示張應力刺激后，Runx2mRNA表達水平上調，且隨加載時間延長呈遞增趨勢。結論:張應力刺激后，成牙骨質細胞內(nèi)Runx2mRNA表達上調。
　　2.應力刺激下成牙骨質細胞內(nèi)Wnt/β-catenin信號傳導通路的活化水平目的:探索應力刺激對成牙骨質細胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號通路的激活效應。方法:應用FX4000T應力加

5、載裝置對成牙骨質細胞株OCCM30分別加載張應力0h、3h、6h、12h，Western blot檢測β-catenin水平。結果:Western blot結果顯示張應力刺激后，β-catenin表達水平上調，且隨加載時間延長呈遞增趨勢。結論:張應力刺激能夠激活成牙骨質細胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號通路。
　　3.經(jīng)典Wnt信號通路對成牙骨質細胞內(nèi)Runx2的調控作用目的:探索經(jīng)典Wnt信號通路對成牙骨質細胞內(nèi)Runx2的調控作用。方法:分

6、別用濃度為20ng/ml，50ng/ml，80 ng/ml，100ng/ml，150ng/ml的DKK1處理成牙骨質細胞株OCCM3048h，Western blot檢測β-catenin水平，RT-PCR檢測Runx2mRNA表達水平。結果:DKK1濃度達到80ng/ml，100ng/ml時β-catenin蛋白表達明顯減少，DKK1濃度為150ng/ml時β-catenin蛋白的量顯著減少，Runx2 mRNA的表達量也相應減少。結

7、論:阻斷經(jīng)典Wnt信號通路RUNX2 mRNA的表達下調。
　　4.張應力刺激下Wnt/β-catenin信號通路對成牙骨質細胞成骨效應的調控目的:探索張應力刺激下Wnt/β-catenin信號通路對成牙骨質細胞成骨效應的調控。方法:將實驗分為A、B、C、D四組，A組為空白對照，不加力不加阻斷劑;B組加力加阻斷劑;C組加力不加阻斷劑:D組不加力加阻斷劑，加阻斷劑組即B、D組加入150ng/mlDKK1，其余兩組加入PBS液，48h