氯化鋰介導(dǎo)經(jīng)典Wnt-β-catenin信號(hào)通路在大鼠脂肪干細(xì)胞增殖和成骨中的作用.pdf

1、目的：探討在體外生長(zhǎng)環(huán)境下不同濃度氯化鋰對(duì)脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：①選擇3w大的SD大鼠腹股溝脂墊中分離出脂肪組織,使用0.1％Ⅰ型膠原酶消化離心后置于含5ml10%FBS/DMEM的培養(yǎng)基中培養(yǎng);選擇第三代脂肪干細(xì)胞接種于6孔板中待細(xì)胞融合到80%換成骨誘導(dǎo)液,每3d換液,誘導(dǎo)7 d后行茜素紅染色。將脂肪干細(xì)胞傳代到第三代,以1

2、×105/孔接種到6孔板中,細(xì)胞融合到80%換成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo),7 d后行油紅O染色。②用含0,2.5,5,10,20,40 mmol/L濃度氯化鋰的培養(yǎng)基分別作用脂肪干細(xì)胞24,48,72 h后,以MTT法測(cè)定氯化鋰對(duì)細(xì)胞增殖的作用。③脂肪干細(xì)胞中加入含0,2.5,5,10,20,40 mmol/L氯化鋰的成骨培養(yǎng)液中培養(yǎng)7 d后測(cè)定細(xì)胞中堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AKP)的蛋白活性;④RT-PCR法檢測(cè)成骨

3、誘導(dǎo)3 d后,不同濃度氯化鋰作用7 d時(shí)脂肪干細(xì)胞中β-catenin,GSK3β,AKP的表達(dá)。
　　結(jié)果：ADSCs成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色陽(yáng)性;成脂誘導(dǎo)后油紅O染色陽(yáng)性;在體外環(huán)境培養(yǎng)下,低濃度氯化鋰(2.5,5,10 mmol/L)作用于ADSCs時(shí)能促進(jìn)細(xì)胞增殖,高濃度氯化鋰(20,40 mmol/L)抑制細(xì)胞增殖,5 mmol/L濃度氯化鋰比其他濃度組更能有效促進(jìn)ADSCs增殖;5 mmol/L氯化鋰能促進(jìn)ADSCs的AK