從Wnt-β-catenin信號通路研究淫羊藿總黃酮對衰老大鼠小腸干細(xì)胞增殖分化功能的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究淫羊藿總黃酮（Total Flavones of Epimedium，TFE）對自然衰老大鼠空腸干細(xì)胞增殖分化功能的調(diào)節(jié)作用及對干細(xì)胞微環(huán)境中Wnt/β-cate nin信號和BMP信號表達(dá)變化的影響。
　　方法：（1）將45只18月齡SPF級雄性S D大鼠隨機分為3組：24M衰老模型組、淫羊藿總黃酮低劑量組、高劑量組，每組15只。其中淫羊藿總黃酮低、高劑量組分別給予淫羊藿總黃酮10mg/kg/day、20mg/kg/d

2、ay，衰老模型組給予生理鹽水灌胃至24月齡，每周停藥一天，連續(xù)6個月。另取15只6月齡雄性SD大鼠作為6M成年對照組。
　?。?）HE染色觀察自然衰老大鼠空腸形態(tài)學(xué)的變化。
　?。?）PAS染色觀察自然衰老大鼠空腸杯狀細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　（4）免疫熒光法觀察活化狀態(tài)空腸干細(xì)胞標(biāo)記物L(fēng)GR5的表達(dá)情況。
　?。?）免疫組化法觀察自然衰老大鼠空腸Bmi1、PCNA、β-catenin、BMP4的表達(dá)情況。
　

3、?。?）Western blot法觀察衰老大鼠β-catenin、Dkk1、GSK-3β、BMP2的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　?。?）HE染色結(jié)果顯示：與6M成年對照組比較，24M衰老模型組空腸絨毛長度明顯變短，排列疏松且不夠規(guī)則，隱窩變淺。給予淫羊藿總黃酮6個月后，與24M衰老模型組比較，大鼠空腸絨毛長度增加，隱窩變深，絨毛排列更為密集。
　?。?）PAS染色及PCNA免疫組化結(jié)果顯示：與6M成年對照組比較，衰老

4、模型組PCNA表達(dá)量及杯狀細(xì)胞數(shù)量均降低，給予淫羊藿總黃酮保護后PCNA表達(dá)量增高，杯狀細(xì)胞數(shù)量增加。
　?。?）免疫組織化學(xué)（熒光）結(jié)果顯示，與6M成年對照組比較，24M衰老模型組空腸干細(xì)胞數(shù)量減少，給予淫羊藿總黃酮保護后，干細(xì)胞數(shù)量增多。
　　（4）Western blot和免疫組化實驗結(jié)果顯示，與6M成年對照組比較，24M衰老模型組小腸干細(xì)胞微環(huán)境中β-catenin、BMP2、BMP4表達(dá)量降低，Dkk1、GSK-3