Wnt-β-catenin信號對BMP9誘導間充質干細胞成骨分化的影響.pdf

1、目的:初步探討經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路協(xié)同BMP9對誘導間充質干細胞成骨分化的影響。
　　方法:
　　(1)以C3H10T1/2為目的細胞，重組腺病毒介導BMP9過表達，聯(lián)用β-catenin重組腺病毒上調經(jīng)典Wnt信號通路關鍵節(jié)點β-catenin的表達，并通過RNA干擾抑制β-catenin的表達;
　　(2)通過化學方法分析其堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性變化，R

2、T-PCR檢測骨鈣蛋白(Osteocalcin，OC)和骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)基因mRNA的轉錄水平，并利用Western blotting檢測OPN及OC的蛋白水平;利用茜素紅S染色檢測鈣鹽沉積;
　　(3)通過異位成骨動物模型，在體外進一步驗證Wnt/β-catenin信號對BMP9誘導間充質干細胞成骨分化的影響。
　　結果:
　　(1) BMP9單獨作用能誘導C3H10T1/2向成骨方向分化，

3、增強ALP活性;單獨的β-catenin無成骨誘導作用，但可劑量依賴性地增強BMP9誘導的C3H10T1/2細胞ALP的活性，并能促進BMP9誘導的OC和OPN的表達及鈣鹽沉積;
　　(2) RNA干擾抑制β-catenin基因表達可顯著降低BMP9誘導的C3H10T1/2細胞的ALP活性(P＜0.05)，并下調OC和OPN的表達，并抑制鈣鹽沉積;
　　(3)裸鼠皮下干細胞移植5W后，取出異位成骨形成的骨塊，大體標本觀測及行