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文檔簡介
1、目的：探討miR-21與BMP9在成骨分化過程的表達關(guān)系，明確miR-21在BMP9誘導(dǎo)成骨分化中的表達情況；揭示miR-21與BMP9聯(lián)合后的成骨效應(yīng)，明確miR-21協(xié)同BMP9的成骨作用；明確miR-21在成骨分化過程中的靶基因，證明其與miR-21的直接靶向作用。
方法：首先用Ad-BMP9感染C2C12，MEFs,C3H10 T1/2細胞，采用Q-PCR方法在0，1，3，5，7，9天檢測miR-21的表達情況。搜集健
2、康人骨髓標(biāo)本，分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞(HMSC)，分別在2,3,4代檢測miR-21的內(nèi)源性表達。觀察miR-21在HMSC分化過程中的表達情況。首先通過檢測早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶染色的變化以及茜素紅 S檢測晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積來驗證miR-21在BMP9誘導(dǎo)成骨分化中的作用。隨后，通過 Western Blot方法來檢測 miR-21，antimiR-21對BMP9/Smad經(jīng)典信號通路下游信號分子 p-Smad1/5/8,Runx
3、2表達的影響。運用生物信息學(xué)分析，搜尋miR-21在BMP9誘導(dǎo)成骨分化中的潛在靶基因，過表達miR-21后檢測Smad7的基因和蛋白水平表達情況。采用雙熒光素酶報告實驗，驗證miR-21與Smad7的直接靶向作用。
結(jié)果：在BMP9誘導(dǎo)成骨分化過程中，隨著培養(yǎng)時間的增加， miR-21在三株細胞中表達升高，3天后表達又會降低。在HMSC傳代過程中，miR-21表達有升高。MiR-21可以增強BMP9誘導(dǎo)的ALP活性和鈣鹽沉積
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