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文檔簡介
1、目的:研究特異序列AT結(jié)合蛋白2(Special AT-rich Sequence-Binding Protein2, SATB2)對骨形態(tài)發(fā)生蛋白9( Bone Morphogenetic Proteins9,BMP9)誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells)的影響,并簡單探討這種影響可能涉及的機(jī)制。
方法:首先用重組腺病毒Ad-BMP9處理C2C12、C3H10T1/2、MEFs細(xì)胞,分別用RT-
2、PCR和Western Blot檢測BMP9對內(nèi)源性SATB2表達(dá)的影響;構(gòu)建過表達(dá)SATB2的重組腺病毒Ad-SATB2,Western Blot驗(yàn)證Ad-SATB2的效果;其次,堿性磷酸酶(ALP)活性定量分析及染色和茜素紅染色分析SATB2對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的早期成骨分化指標(biāo) ALP和晚期成骨分化指標(biāo)鈣鹽沉積的影響;再次,Q-PCR或Western Blot檢測SATB2對BMP9誘導(dǎo)的靶基因Id1、Id2、Id3以及轉(zhuǎn)錄
3、因子 Runx2、Osterix、Dlx5等成骨相關(guān)基因的影響;最后,熒光素酶報告實(shí)驗(yàn)檢測SATB2對BMP9誘導(dǎo)的磷酸化Smad1/5/8的影響。
結(jié)果:首先BMP9可以促進(jìn)SATB2的表達(dá),Ad-SATB2能在間充質(zhì)干細(xì)胞中成功表達(dá);其次,SATB2可以誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的ALP活性和鈣鹽沉積,且能明顯增加BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的ALP活性和鈣鹽沉積;再次,SATB2可以誘導(dǎo) Id1、Id2、Id3以及轉(zhuǎn)錄因子Runx2
4、、Osterix、Dlx5等成骨相關(guān)基因的表達(dá),且能加強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的Id1、Id2、Id3以及轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osterix、Dlx5等成骨相關(guān)基因的表達(dá);最后,SATB2誘導(dǎo)Smad1/5/8的調(diào)控活性,且能增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8的調(diào)控活性。
結(jié)論:SATB2可以誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨早期和晚期分化,以及Id1、Id2、Id3、Runx2、Osterix、Dlx5基因的表達(dá);SATB2能加強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的
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