人胃癌奧沙利鉑耐藥細胞系OCUM-2MD3-L-OHP的建立及其多藥耐藥機制的研究.pdf

1、目的：我國胃癌死亡率居惡性腫瘤之首，化療作為腫瘤術(shù)后最有效的輔助治療手段，在防治腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移方面作用舉足輕重。雖然目前胃癌的化療方案不斷完善，但部分胃癌患者對化療的療效并不理想，其中多藥耐藥(MDR)是導(dǎo)致化療失敗的根本所在。MDR是指腫瘤組織對多種化學(xué)結(jié)構(gòu)完全不同，作用機理各異的抗腫瘤藥物具有交叉耐受性質(zhì)。MDR 現(xiàn)象有兩種表型：一種是首次使用化療藥物就產(chǎn)生耐藥，稱為原發(fā)性耐藥；另一種則是在化療過程中產(chǎn)生耐藥，稱繼發(fā)性耐藥。胃癌具

2、有原發(fā)性耐藥和繼發(fā)性耐藥的雙重特點。有研究證明P-糖蛋白(P-gp)的過表達是胃癌產(chǎn)生 MDR 的最為突出的普遍的變化。Livin 和 Survivin同屬于凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族，它們在介導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡及多藥耐藥方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，其中Livin是IAP家族的新成員。奧沙利鉑(L-OHP)是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類抗癌藥，已逐漸作為治療進展期胃癌的主要藥物，并顯示出良好的應(yīng)用前景。雖然國內(nèi)外已建立起不同胃癌耐藥細胞

3、系，但胃癌奧沙利鉑耐藥細胞系的建立以及Livin和Survivin在低分化胃癌耐藥細胞和親本細胞中表達的研究尚未見報道。為進一步揭示胃癌多藥耐藥的機理，本研究首次建立人胃癌耐藥細胞系OCUM-2MD3/L-OHP，研究其細胞生物學(xué)特點以及P-gp、Livin和Survivin與胃癌多藥耐藥的關(guān)系，并對P-gp、Livin和Survivin介導(dǎo)多藥耐藥的機制作了初步探討。 方法：人胃癌高侵襲轉(zhuǎn)移細胞系 OCUM-2MD3 在DM

4、EM培養(yǎng)液中，37℃、5％的CO<,2>飽和濕度下培養(yǎng)，用0.25％的胰蛋白酶消化傳代；采用大劑量L-OHP24h反復(fù)間歇暴露法建立人胃癌高侵襲轉(zhuǎn)移奧沙利鉑耐藥細胞系OCUM-2MD3/L-OHP；應(yīng)用倒置相差顯微鏡和電鏡觀察耐藥細胞系的形態(tài)學(xué)改變；通過細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線，根據(jù)公式：Td(h)=T×[log2/(logN-logN<,0>)]，計算耐藥細胞系的倍增時間；應(yīng)用流式細胞儀(FCM)檢測藥細胞系的細胞周期分布和凋亡情況

5、；應(yīng)用MTT法測定耐藥細胞系的藥物敏感性；應(yīng)用流式細胞儀檢測P-gp、Survivin及Livin在耐藥細胞系及其親本細胞系中的表達。實驗數(shù)據(jù)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件處理，P<0.05時認(rèn)為差異具有顯著性。 結(jié)論： 1.OCUM-2MD3細胞系具有原發(fā)多藥耐藥特點，其耐藥機制與P-gP、Livin和Survivin的表達有關(guān)。 2.OCUM-2MD3/L-OHP細胞系對L-OHP耐藥指數(shù)為4-3，為低度耐藥

6、且耐藥穩(wěn)定，此外耐藥細胞對CBDCA、5-Fu、MMC、GEM、VCR和IH等多種抗癌藥產(chǎn)生交叉耐藥，具有繼發(fā)多藥耐藥特征。 3.OCUM-2MD3/L-OHP細胞系繼發(fā)多藥耐藥的機制與其細胞周期分布發(fā)生改變、倍增時間延長以及P-gp表達上調(diào)有關(guān)。 4.P-gp、Livin和Survivin介導(dǎo)多藥耐藥的機制與其抑制腫瘤細胞凋亡有關(guān)。 綜上所述，本研究成功建立 OCUM-2MD3/L-OHP 細胞系，并可用于胃癌