三七總皂甙(PNS)對于四環(huán)素誘導的兔胸膜腔粘連及纖維化的影響.pdf

1、目的:胸膜腔給予四環(huán)素建立兔胸膜粘連及纖維化模型,觀察胸膜腔內給予三七總皂苷(PNS)后胸膜腔積液特征(葡萄糖、白細胞、乳酸脫氫酶、蛋白)、胸腔積液引流量的變化;通過酶聯(lián)標記吸附試驗(ELASA)檢測胸腔積液中生長轉化因子(TGF)-β、血管通透因子(VEGF)的變化;14天處死動物打開胸膜腔,觀察胸膜腔粘連情況,評定胸膜粘連積分,取材兔胸膜組織做HE、Masson染色,觀察胸膜厚度、膠原沉積情況,以此來評定PNS對四環(huán)素誘導的兔胸膜粘

2、連及纖維化的影響,探索治療胸膜粘連及纖維化的新藥物。
　　 方法:60只新西蘭白兔(雌雄各半,體重2.5～3.0 Kg)隨機分為6組,分別為對照組,模型組,PNS低、中、高劑量組、尿激酶組,每組10只。所有動物均與右胸膜腔放置胸腔積液引流管。對照組每只動物通過胸腔引流管給予生理鹽水3.0 ml,其余各組每只動物均給與四環(huán)素鹽酸鹽溶液35 mg/kg,12小時之后對照組仍給予生理鹽水3.0 ml,PNS低、中、高劑量組每只動物分別

3、給予PNS20 mg/kg、40mg/kg、80 mg/kg,尿激酶組給予尿激酶劑量1500IU/只,每隔12小時一次,直至96小時拔出引流管為止,共給藥8次。給藥前分別于24、48、72、96小時通過引流管抽取胸腔積液,記錄其量、性狀并留適量作生化檢測和酶聯(lián)免疫吸附試驗。實驗期間,所有動物均自由飲水,攝食。14天時處死所有動物,打開胸膜腔,觀察并記錄每組動物胸膜粘連積分情況;取胸膜組織固定、包埋、切片、作HE、Masson染色,用于鏡

4、下觀察。
　　 結果:
　　 1.四環(huán)素誘導的兔胸膜腔粘連及纖維化模型
　　 模型組10只動物中8只完成實驗,2只死于血胸;PNS低劑量組10只動物中9只完成實驗,1只咬斷引流管,氣胸致死;PNS高劑量組10只動物中9只完成實驗,1只引流管脫落,懷疑氣胸致死;尿激酶組10只動物中9只完成實驗,1只不明原因死亡;對照組和PNS中劑量組10只均完成實驗。
　　 2.胸腔積液引流量
　　 24小時胸腔積

5、液引流量各組間無明顯差異(除外對照組),模型組有兩例胸液呈血性,尿激酶組有兩例胸液淡粉色,其余均為淡黃色。48小時模型組兩例血性胸液顏色變淺,尿激酶組兩例粉紅色胸液轉為淡黃色。其余沒有變化。48,72小時,96小時胸腔積液引流量各組間差異有顯著性,PNS高劑量組,尿激酶組引流量均低于其它各組。PNS高劑量組胸腔積液引流量48小時達高峰并且低于同時刻其它各組胸液引流量,其余各組72小時引流量達高峰,此后逐漸降低。
　　 3.胸腔積

6、液生化特征
　　 3.1蛋白質含量:各組胸腔積液中蛋白質含量隨時間推移都呈下降趨勢,24小時各組比較差異無統(tǒng)計學意義。48小時,PNS高劑量組與其它組比較差異具有顯著性(P＜0.05),明顯低于其它組。72小時,96小時PNS高劑量組、尿激酶組胸液中蛋白質含量明顯降低,與同時間其它各組比較差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 3.2白細胞數(shù)值:24、48小時各組間胸液中白細胞數(shù)值無統(tǒng)計學意義,72、96小時PNS高劑量組

7、與同時刻各組比較差異具有顯著性(P＜0.05),明顯低于其它組。隨時間推移,各組白細胞均呈下降趨勢
　　 3.3乳酸脫氫酶(LDH)含量:胸液中LDH含量在同一時間段各組間比較無顯著性差異,同一組不同時間段比較顯示,隨時間變化逐漸降低。
　　 3.4葡萄糖含量:隨時間推移各組胸腔積液中葡萄糖含量有逐步增高現(xiàn)象。48小時PNS高劑量組明顯高于其它組。
　　 4細胞因子含量
　　 4.1轉化生長因子(TGF-

8、β)含量:24小時、48小時PNS高劑量組胸液TGF-β含量明顯低于其它四組,有顯著性差異(P＜0.05),72、96小時PNS高劑量組和尿激酶組與其它三組比較TGF-β含量也明顯偏低,有顯著性差異(P＜0.05)。同一組不同時間段比較:模型組和PNS低劑量組48小時后胸腔積液中TGF-β含量迅速升高,而其它三組也同樣有升高趨勢但曲線變化較為平緩。
　　 4.2血管通透性因子(VEGF)含量:在各同時刻點PNS高劑量組胸液中VE

9、GF含量低于其它各組,差異有統(tǒng)計學意義。除PNS低劑量組胸液VEGF含量在72小時達高峰外,其余各組胸液VEGF含量均在48時達最高值,此后逐漸下降。
　　 5胸膜腔情況和胸膜粘連積分
　　 5.1胸膜腔情況:大體觀察對照組右側胸膜腔:胸膜光滑、無粘連,模型組、低、中劑量PNS組:胸膜粘連廣泛,形成多個粘連帶,有1例出現(xiàn)血胸,PNS高劑量組、尿激酶組:胸膜間有少許粘連帶出現(xiàn)。
　　 5.2胸膜粘連積分:PNS高劑

10、量組和尿激酶組胸膜粘連積分均低于其余各組,分別為(1.56±0.53)、(1.44±0.53),差異有統(tǒng)計學意義。
　　 6胸膜病理情況
　　 6.1鏡下觀察所見:對照組HE染色可見胸膜很薄,間皮細胞為扁平狀,結締組織中炎細胞、成纖維細胞不明顯;Masson染色未見或僅有極少量膠原。模型組、低、中劑量PNS組HE染色可見胸膜均較厚,間皮下有大量炎細胞,成纖維細胞。表面間皮細胞可見呈立方形偶見脫落;Masson染色可見間皮

11、下增厚的結締組織呈現(xiàn)藍綠色,存在大量膠原纖維。PNS高劑量組和尿激酶組HE染色可見胸膜厚度比上述三組有所降低,炎細胞、成纖維細胞有所減少。Masson染色可見間皮下的結締組織藍綠色較前述三組顏色變淺,提示膠原纖維減少。
　　 6.2胸膜厚度:PNS高劑量組和尿激酶組胸膜厚度為:(71.22±33.02)μm、(100.00±57.01)μm,與其余組比胸膜厚度明顯偏低,差異有顯著性(P＜0.001)。
　　 6.3成纖維

12、細胞數(shù):PNS高劑量組和尿激酶組胸膜中成纖維細胞數(shù)分別為(93.33±25.29)/mm2、(113.55±35.87)/mm2,與其余組比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。
　　 結論:
　　 135mg/kg四環(huán)素鹽酸鹽注入兔胸腔可誘導產生明顯的胸膜粘連及纖維化,為研究三七總皂苷成功復制動物模型。
　　 2三七總皂苷可降低胸液量,減少胸水中TGF-β,VEGF的產生,減少成纖維細胞數(shù)量,抑制膠原產生,有效減