熱證肺癌HSP70—PC對人肺癌細胞免疫效應的研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學博士學位論文熱證肺癌HSP70—PC對人肺癌細胞免疫效應的研究姓名：韓霞申請學位級別：博士專業(yè)：中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導教師：王洪琦20060401方法：首先將凍存的人肺癌A一549細胞株進行復蘇、然后培養(yǎng)細胞換液、腫瘤細胞的傳代培養(yǎng)、細胞計數(shù)、培養(yǎng)細胞凍存；結(jié)果：顯微鏡下觀察細胞生長良好，增殖旺盛，細胞呈上皮樣排列，單層貼壁生長，有重疊現(xiàn)象。除有絲分裂階段和衰老退變的細胞呈圓球外，以不規(guī)則多邊形細胞為主，中夾有圓形核。實驗二不同

2、證候肺癌組織lISP70一PC的分離、純化、方法：嚴格按照疾病和證候診斷標準選取熱證和非熱證原發(fā)性非小細胞肺癌患者，進行中醫(yī)臨床辨證，分為熱證組和非熱證組，手術(shù)切除各組患者肺癌組織和遠端『F常肺組織，進行新鮮標本的收集和制備。運用蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)從組織中提取lISP70PC，獲得IISP70制劑，發(fā)揮免疫抗瘤效應的物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)果：運用SDS—PAGE進行初步檢測，法國凝膠成像系統(tǒng)BioCapt軟件分析，低分子量標準蛋白質(zhì)作對照，結(jié)果發(fā)

3、現(xiàn)3mMADP緩沖液D洗脫后的收集液在70kD處有一清晰蛋白帶，且于分子量約43kD、82kD處分別有一雜蛋白帶，有待于進一步純化。根據(jù)ADP—agarose蛋白洗脫液SDSPAGE檢測結(jié)果，將含有70kD蛋白帶的洗脫液過DEAE離了交換柱，0—100％1MNaCl梯度洗脫，收集蛋白峰洗脫液，經(jīng)SDS—PAGE電泳檢測，存第一個蛋白洗脫峰I!|J130180mMNaCl鹽濃時于70kD處有一純蛋白帶。實驗二不同證候肺癌HSP70一PC與

4、DC成熟的關(guān)系方法：采用MTT法和放射免疫法檢測：結(jié)果：①培養(yǎng)初可見有較多粘附網(wǎng)形細胞，第3一d天可見細胞形態(tài)明顯改變，胞體出現(xiàn)捌突狀突起，第5—6天后，細胞大多呈懸浮生K，為典型樹突狀細胞外形，繼而呈集落樣生長，培養(yǎng)7天后，細胞均勻分布在培養(yǎng)基中，呈疏松的貼壁生長，胞體較大，可見樹突狀突起。②研究結(jié)果表明：熱證癌Pc組和非熱證癌Pc組均能夠有效誘導樹突狀細胞成熟。熱證癌Pc組和非熱證癌PC組，與空白對照組，有屆著性差異(PO05)。實