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文檔簡介
1、近年來,腫瘤的發(fā)病率和死亡率不斷攀升,嚴(yán)重危害了人類的生命健康,而傳統(tǒng)的腫瘤治療方法和藥物存在很多問題,所以研究和開發(fā)新型靶向性抗腫瘤藥物,具有重要的社會意義和廣泛的應(yīng)用前景。
本課題利用EGF與EGFR結(jié)合的靶向性及腺病毒E4orf4蛋白選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性而設(shè)計(jì)并構(gòu)建的融合蛋白EGF-E4orf4的酵母表達(dá)載體,并在畢赤酵母中分泌性的表達(dá)了EGF-E4orf4融合蛋白。前期工作對融合蛋白的生物活性和藥效學(xué)進(jìn)行了
2、初步研究:細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,融合蛋白EGF-E4orf4對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞BT325和入骨肉瘤細(xì)胞Saos-2都有抑制作用。動物實(shí)驗(yàn)顯示,融合蛋白EGF-E4orf4可以抑制MDA-MB-231和BGC823細(xì)胞的裸鼠移植腫瘤的生長,最大抑瘤率分別為79%49%(P<0.05)。在急毒實(shí)驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)EGF-E4orf4蛋白對裸鼠有任何毒副作用。因此融合蛋白EGF-E4orf4很有希望成為治療腫瘤的新藥。<
3、br> 本論文的第一部分工作,主要是針對融合蛋白EGF-E4orf4的表達(dá)和純化條件,做了進(jìn)一步優(yōu)化以爭取提高目的蛋白的純度、提高純化效率。同時(shí),配合合作單位在中試發(fā)酵生產(chǎn)和純化工藝方面進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)摸索。在此基礎(chǔ)上對得到的融合蛋白純品進(jìn)行了一些理化及生物活性性質(zhì)鑒定,為今后融合蛋白EGF-E4orf4實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)創(chuàng)造條件。
本論文的第二部分工作系鑒定證實(shí)融合蛋白是以多聚體形式存在,并對其結(jié)構(gòu)做了一些實(shí)驗(yàn)分析,希
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