兩種抗腫瘤藥物靶向脂質(zhì)體的制備與評價.pdf

1、近年來,脂質(zhì)體作為一種新型藥物轉(zhuǎn)運載體,成為抗腫瘤藥物制劑研究的熱點之一。然而,傳統(tǒng)脂質(zhì)體制劑存在對疏水性藥物包封率低,且容易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別和清除的缺陷,藥物藥效發(fā)揮受到限制。因此,開發(fā)藥物包封率高,靶向性好的脂質(zhì)體成為抗腫瘤藥物脂質(zhì)體研究的趨勢之一。
　　本課題分為兩個部分,分別研究結(jié)構(gòu)修飾后的兩種脂質(zhì)體對抗腫瘤藥物在體內(nèi)循環(huán)時間,藥物組織分布的影響。在第一部分研究中,主要考察環(huán)糊精包合物脂質(zhì)體技術(shù)對抗腫瘤藥物藥效的影響。以

2、疏水性藥物吉非替尼(Gefitinib,GEF)為模型藥物,制備GEF環(huán)糊精包合物脂質(zhì)體,對脂質(zhì)體理化性質(zhì),體外釋放,細胞毒性和體內(nèi)藥動學行為進行初步系統(tǒng)研究;在第二部分研究中,主要考察葉酸靶向制劑技術(shù)對抗腫瘤藥物藥效的影響。實驗合成一種新型葉酸PEG衍生物片段——葉酸-CONH-聚乙二醇-NH-膽固醇(folate-CONH-PEG-NH-Cholesterol),以鹽酸阿霉素(DOX·HCl)為模型藥物,制備葉酸靶向鹽酸阿霉素脂質(zhì)體

3、(F-DOX-L),并對其理化性質(zhì),體外釋放,細胞毒性,小鼠體內(nèi)藥動學和組織分布進行系統(tǒng)研究。
　　在第一部分里,分別建立了紫外分光光度法和LC-MS/MS測定脂質(zhì)體和小鼠血漿樣品中吉非替尼的含量方法學。以脂質(zhì)體包封率為指標,考察不同磷脂組成和水化介質(zhì)對包封率的影響。最終選定兩種脂質(zhì)體制備處方,分別為EPC/Chol/mPEG-DSPE(55:40:5,mol/mol),水化介質(zhì)0.3M(NH4)2SO4和0.1M HPβCD;H

4、SPC/Chol/mPEG-DSPE(55:40:5,mol/mol),水化介質(zhì)0.3M(NH4)2SO4和0.1M HPβCD。按照兩種處方制得的脂質(zhì)體包封率分別為98.1±0.8％和85.5±1.2％,粒徑分別為136.2±12.4nm和155.4±14.9nm?？疾靸煞N脂質(zhì)體在PBS(pH7.4)緩沖鹽溶液介質(zhì)中的釋放發(fā)現(xiàn),兩種脂質(zhì)體72h釋放量均<40％。穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明,兩種脂質(zhì)體在4℃保存一個月,制劑穩(wěn)定性好。實驗結(jié)果表明

5、,環(huán)糊精包合物可以穩(wěn)定包裹GEF,并延長其釋放時間。體外細胞毒性試驗結(jié)果表明,藥物制備成脂質(zhì)體后,細胞毒性明顯下降。兩種GEF脂質(zhì)體在A549細胞中IC50值分別是游離GEF的15和20倍。
　　在體內(nèi)藥動學實驗中,分別給小鼠靜脈注射GEF溶液和GEF環(huán)糊精包合物脂質(zhì)體(L-GEF-HSPC),測定血藥濃度并計算藥動學參數(shù),GEF脂質(zhì)體的t1/2β,MRT,AUC值為分別為GEF溶液的3.23,3.91和6.22倍。表明環(huán)糊精包合

6、物GEF脂質(zhì)體可以提高小鼠血漿中藥物濃度,延長藥物在體內(nèi)循環(huán)時間。
　　在第二部分中,實驗合成新型葉酸PEG衍生物folate-CONH-PEG-NH-Chol,通過MS對產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進行初步驗證。并使用合成的葉酸PEG衍生物制備葉酸靶向鹽酸阿霉素脂質(zhì)體(F-DOX-L)和鈣黃綠素脂質(zhì)體(F-Calcein-L)。分別建立了紫外分光光度法和熒光分光光度法測定脂質(zhì)體和小鼠血漿及組織樣品中鹽酸阿霉素含量的方法學。通過熒光顯微鏡和流式細胞儀

7、,考察葉酸靶向/非靶向鈣黃綠素熒光脂質(zhì)體(F-Calcein-L/Calcein-L)被KB,Hela和SMMC-7721三種細胞攝取的情況。實驗結(jié)果表明,葉酸受體高表達的KB,Hela細胞對F-Calcein-L的攝取明顯高于Calcein-L,且這種現(xiàn)象可以被1mM游離葉酸競爭性抑制,而在SMMC-7721中,細胞對兩種脂質(zhì)體的攝取無顯著差別。表明合成的葉酸PEG衍生物制備的脂質(zhì)體在體外細胞實驗中表現(xiàn)出較強的葉酸靶向性?？疾霧-DO

8、X-L,DOX-L和游離DOX在KB和Hela細胞中的IC50發(fā)現(xiàn),制備成脂質(zhì)體后,藥物細胞毒性下降,其中,葉酸靶向脂質(zhì)體比非靶向脂質(zhì)體表現(xiàn)出更高的細胞毒性。
　　小鼠尾靜脈注射F-DOX-L,DOX-L和游離DOX后,考察藥物在血漿中濃度和小鼠組織內(nèi)分布情況發(fā)現(xiàn),脂質(zhì)體組的小鼠血藥濃度明顯高于游離藥物組,且脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)時間顯著延長。研究脂質(zhì)體和藥物溶液在小鼠體內(nèi)組織分布發(fā)現(xiàn),DOX溶液組在小鼠體內(nèi)分布較為迅速、廣泛,與游離D