溶栓劑基因的克隆與載體構(gòu)建及苯噻草胺與旱地植物DNA相互作用的研究.pdf

1、通過(guò)查閱大量文獻(xiàn),確定開(kāi)展溶栓劑基因克隆與表達(dá)及除草劑與旱地植物DNA的相互作用研究,取得了如下成果.1.纖溶酶原可在溶纖酶激活劑作用下被激活,形成具有生物活性、可催化血栓纖維蛋白水解的纖溶酶,從而消除血栓,治療疾病.該實(shí)驗(yàn)室嘗試采用轉(zhuǎn)基因技術(shù),將溶栓劑基因轉(zhuǎn)入植物,利用植物反應(yīng)器來(lái)生產(chǎn)溶栓藥物.該論文進(jìn)行了該項(xiàng)目的前期工作,運(yùn)用DNA重組技術(shù),將該實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的溶栓劑基因亞克隆于穿梭質(zhì)粒pBI121中,構(gòu)建了溶栓劑基因表達(dá)載體pBI12

2、1-zzq,并將它轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α.穿梭質(zhì)粒pBI121含有編碼卡那霉素抗性的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因,用含有Km的培養(yǎng)基篩選菌株.從菌株中提取的重組質(zhì)粒pBI121-zzq用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)鑒定.在200bp左右有一大小與溶栓劑基因大小相符的條帶,表明大腸桿菌轉(zhuǎn)化體中含有溶栓劑的亞克隆質(zhì)粒.pBI121-zzq轉(zhuǎn)化LBA4404用Str和Km雙抗培養(yǎng)基篩選,經(jīng)瓊脂糖電泳實(shí)驗(yàn)證實(shí),pBI121-zzq在農(nóng)桿菌LBA4404中成功表達(dá),

3、為開(kāi)發(fā)新型藥用植物奠定了基礎(chǔ).2.用紫外分光光度法研究了玉米和狗尾草等旱地植物DNA與除草劑的作用.首先優(yōu)化了提取DNA的條件.(1)采用SDS法提取西紅柿(含玉米)DNA.實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),提取西紅柿、玉米DNA最優(yōu)條件為:細(xì)胞提取液4.0ml,飽和KCl溶液1.5ml,酚/氯仿/異戊醇溶液為樣液體積的0.8倍,其中酚與氯仿/異戊醇的比值為24:25:1,氯仿/異戊醇溶液為樣液體積的0.7倍,異丙醇為樣液體積的0.9倍.(2)采用紫外光譜