血管內(nèi)皮生長因子在膀胱腫瘤血、尿中的表達(dá)和反義基因治療的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子在膀胱腫瘤血、尿中的表達(dá)和反義基因治療的研究姓名：金建軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：泌尿外科指導(dǎo)教師：張元芳20030429該樣本中尿肌酐濃度進(jìn)行校正。結(jié)果以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的光密度值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)的VEGF濃度。所有膀胱癌患者和對照者血清、尿液中均檢測到VEGF。膀胱癌患者血清和尿液VEGF平均水平分別為3485322580pg／mL和5765439050n

2、g／gCr，都顯著高于對照組(血清、尿液VEGF分別為123895019pg／mL和60083626ng／gcr)。膀胱癌病人隨著分期升高而血清、尿液VEGF均呈相應(yīng)升高的趨勢。浸潤性膀胱腫瘤中血清和尿液中VEGF水平明顯比表淺性膀胱腫瘤要高。腫瘤切除術(shù)后3個月，絕大多數(shù)膀胱癌患者血清和尿液VEGF明顯下降，而腫瘤復(fù)發(fā)者則又出現(xiàn)明顯升高。結(jié)論本研究用ELISA定量分析的方法證明VEGF在膀胱腫瘤患者的血清和尿液中表達(dá)明顯升高，并與腫瘤分

3、期和分級密切相關(guān)，術(shù)后膀胱腫瘤患者血清和尿中VEGF水平降低，而復(fù)發(fā)者VEGF水平又重新升高，表明它們可以作為膀胱癌的腫瘤標(biāo)記物?？赏鳛轭A(yù)后評估、療效評價和術(shù)后隨訪監(jiān)測的指標(biāo)。關(guān)鍵詞血管內(nèi)皮生長因子，膀胱腫瘤，血清，尿液，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)第二部分入反義VEGFt2，eDNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建目的構(gòu)建pcDNA。As—VEGF，。。重組質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究VEGF反義基因?qū)Π螂啄[瘤的治療作用奠定基礎(chǔ)。材料與方法根據(jù)pcDNA。真核表達(dá)載體多克

4、隆位點(diǎn)區(qū)特點(diǎn)和VEGF。N端和C端氨基酸序列設(shè)計上游引物和下游引物。上游引物：5’GCCGAATTCATGAACTTTCTGCTGTCTT一3’：下游引物：5’書TTGGATCCTTATCACCGCCTCGGCTT一3’。上游引物引入EcoRI位點(diǎn)。下游引物引入BamHI位點(diǎn)，以pcDNA。VEGFm為模扳。PCR擴(kuò)增VEGF。cDNA，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)Klenow酶補(bǔ)平，Ba州I和EeoRI雙酶切后，回收目的片段(O48kh)。pcONA3