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1、該實(shí)驗(yàn)根據(jù)VEGF的這些生物活性,將負(fù)載有鼠VEGF120cDNA的真核表達(dá)質(zhì)粒pCDNA3.1注射至新生鼠缺氧缺血腦損傷局部,探討VEGF對(duì)新生鼠缺氧缺血性腦損傷(Hypoxic-ischemic brain damage HIBD)的治療作用.方法:一、構(gòu)建真核表達(dá)載體PCDNA3.1/rVEGF120.二、通過(guò)結(jié)扎左頸總動(dòng)脈,吸入8﹪氧氣制備左腦HEBD的新生鼠模型.三、將48只7日齡SD大鼠隨機(jī)分為兩組:(一)、對(duì)照組 制備HI
2、BD后,即刻通過(guò)前囟注射空載質(zhì)粒100μg/只,回籠喂養(yǎng)7天;(二)、治療組,制備HIBD模型后,即刻通過(guò)前囟注射載有rVEGF120基因的質(zhì)粒100μg/只,回籠喂養(yǎng)7天.在規(guī)定時(shí)間內(nèi),斷頭處死,即刻取出大腦,每組各取6全鈷、免疫組化 腦組織在經(jīng)4﹪甲醛固定后,常規(guī)石蠟包埋,應(yīng)用LSAB法檢測(cè)VEGF蛋白的表達(dá)情況.四、蛋白點(diǎn)雜交 取新鮮腦組織,提取總蛋白,用點(diǎn)雜交儀加樣后,測(cè)定VEGF蛋白的表達(dá)情況.五、流式細(xì)胞儀 將腦組織制成單細(xì)
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