丙泊酚對指多糖誘導(dǎo)的Anal細(xì)胞髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體1表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 脂多糖(lipopoly-saccharidc,LPS)是革蘭陰性桿菌細(xì)胞壁的主要組成部分,是引起全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、膿毒癥以及多器官功能障礙綜合癥的重要誘因。髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體1(Triggeringreceptor expressed on myeloid cells1,TREM1)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種有選擇性地表達(dá)于中

2、性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等髓樣細(xì)胞表面的跨膜受體,能觸發(fā)和放大細(xì)菌和真菌等誘發(fā)的炎癥反應(yīng),在全身炎癥反應(yīng)綜合征和膿毒癥的發(fā)生中起關(guān)鍵性作用。因而調(diào)控或者干預(yù)TREM1在膿毒癥等炎癥性疾病中的表達(dá)日益受到人們的重視。丙泊酚是一種新型短效的全身靜脈麻醉藥,具有起效快,作用完全,可控性強(qiáng)的特點(diǎn),廣泛用于臨床麻醉及ICU危重病人的鎮(zhèn)靜。有研究表明,丙泊酚在產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用的同時(shí),還具有抗氧化及抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的TNF-α,IL-6,IL-8等細(xì)胞因子的生成

3、等作用,其機(jī)理目前尚不十分清楚。丙泊酚是否能調(diào)控TREM1的表達(dá),未見國內(nèi)外報(bào)道。本研究觀察丙泊酚對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠Anal細(xì)胞TREM1蛋白的表達(dá)及細(xì)胞因子釋放的影響,旨在從髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體信號(hào)通路的角度,探討丙泊酚的抗炎機(jī)理,為丙泊酚在臨床麻醉和ICU的合理運(yùn)用提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 Anal細(xì)胞懸浮于含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中,在37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中孵育。采用不同濃度的LPS

4、:1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml與Anal細(xì)胞共孵育Oh、6h、12h、24h和48h后,采用流式細(xì)胞術(shù)測定不同濃度內(nèi)毒素刺激下,不同時(shí)間點(diǎn)Anal細(xì)胞TREM1的表達(dá)水平,以確定最佳的內(nèi)毒素刺激TREM1表達(dá)的時(shí)間劑量關(guān)系;然后采用不同濃度的丙泊酚干預(yù)最佳濃度的內(nèi)毒素預(yù)處理的Anal細(xì)胞,其丙泊酚濃度為1.0μg/ml和5.0μg/ml。將Anal細(xì)胞隨機(jī)分組:正常對照組(C組),內(nèi)毒素組(L組),

5、小劑量丙泊酚組(P1組)和大劑量丙泊酚組(P2組),分別在Oh、6h、12h、24h和48h進(jìn)行如下測量:流式細(xì)胞術(shù)測定。TREM1的表達(dá)水平;半定量RT-PCR方法測定TREM1 mRNA的表達(dá)水平;ELISA方法測定TNF-α的表達(dá)水平;對所測定的指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1在不同時(shí)間點(diǎn)由不同濃度的內(nèi)毒素刺激時(shí)TREM1蛋白的表達(dá)變化采用流式細(xì)胞術(shù)測定TREM1蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示:空白對照組各時(shí)間

6、點(diǎn)TREM1的表達(dá)無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與內(nèi)毒素刺激6h時(shí)點(diǎn)比較,1、10、100、1000ng/ml各組Anal細(xì)胞TREM1蛋白表達(dá)均在12h明顯升高,24h達(dá)峰值,在48h開始下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與空白對照組比較,1ng/ml內(nèi)毒素組TREM1蛋白的表達(dá)在6h、12h、24h和48h各時(shí)點(diǎn)均明顯升高,在10ng/ml組進(jìn)一步升高,在100ng/ml組達(dá)到峰值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢妰?nèi)毒素

7、濃度與Anal細(xì)胞TREM1蛋白的表達(dá)水平呈時(shí)間劑量依賴性關(guān)系。
　　 2丙泊酚對內(nèi)毒素刺激的Anal細(xì)胞TREM1蛋白表達(dá)水平的影響采用流式細(xì)胞術(shù)測定TREM1蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示:與內(nèi)毒素共同孵育的Anal細(xì)胞TREM1的表達(dá)水平明顯高于空白對照組(P＜0.05)。小劑量丙泊酚組Anal細(xì)胞TREM1的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。大劑量丙泊酚組Anal細(xì)胞TREM1的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比明顯

8、降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3丙泊酚對內(nèi)毒素刺激的Anal細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α表達(dá)水平的影響采用ELISA方法檢測Anal細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α的表達(dá)水平,結(jié)果顯示:與內(nèi)毒素共同孵育的Ana-1細(xì)胞培養(yǎng)液中下游炎癥因子TNF-a表達(dá)水平高于空白對照組(P＜0.01)。小劑量丙泊酚組Ana-1細(xì)胞培養(yǎng)基中TNF-α的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。大劑量丙泊酚組Anal細(xì)胞培養(yǎng)基中T

9、NF-α的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比明顯降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 4丙泊酚對內(nèi)毒素刺激的Anal細(xì)胞TREM1 mRNA表達(dá)水平的影響采用半定量RT-PCR測定Anal細(xì)胞TREM1 mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示:與內(nèi)毒素共同孵育的Anal細(xì)胞TREM1 mRNA的表達(dá)水平高于空白對照組(P＜0.05)。小劑量丙泊酚組Anal細(xì)胞TREM1 mRNA的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。大劑量

10、丙泊酚組小鼠Anal細(xì)胞TREM1 mRNA的表達(dá)水平與內(nèi)毒素組相比明顯降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 5相關(guān)分析結(jié)果顯示,Anal細(xì)胞表面YREM1的表達(dá)水平和下游炎癥因子TNF-α的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.912,P＜0.01)。Anal細(xì)胞TREM1 mRNA的表達(dá)水平和下游炎癥因子TNF-α的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.917,P＜0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 初步證實(shí)了內(nèi)毒