草原龍膽C-D類MADS-box基因克隆與表達(dá)分析.pdf

1、花器官發(fā)育的ABC模型的擴(kuò)展與修飾說(shuō)明植物MADS-box基因家族在花發(fā)育進(jìn)程中具有重要調(diào)節(jié)功能，經(jīng)過(guò)基因重復(fù)、功能分化、互作網(wǎng)絡(luò)精調(diào)而導(dǎo)致被子植物花形態(tài)的多樣性。從單一模式植物轉(zhuǎn)向多種植物聯(lián)合分析，通過(guò)比較研究，將有助于闡釋花部性狀發(fā)育及其多樣性的分子機(jī)制。
　　草原龍膽(Eustoma grandiflorum)為龍膽科(Gentianceae)草原龍膽屬(gentian)草本觀賞植物，既具有單瓣花又有重瓣花，重瓣花的四輪花器

2、官發(fā)育正常且雄蕊數(shù)目穩(wěn)定，這與重瓣花多存在雄蕊瓣化的現(xiàn)象不同。為探討草原龍膽花器官發(fā)育的分子機(jī)理，針對(duì)C/D類MADS-box基因開(kāi)展了以下幾方面的研究:
　　1.C/D類MADS-box基因的克隆
　　以草原龍膽不同發(fā)育階段的混合花芽RNA為模板，用基因特異性引物，分別利用3'-RACE和RT-PCR技術(shù)，克隆了C功能基因EgPLE1和D功能基因EgMADS1。兩類基因的C末端均具有保守的AG基序Ⅰ和AG基序Ⅱ，屬于AG-

3、like亞家族。Southern雜交結(jié)果顯示，EgPLE基因在基因組中可能有多個(gè)拷貝，EgMADS1基因在基因組中可能有4個(gè)拷貝。
　　2.D類MADS-box基因的表達(dá)分析
　　用Northern雜交技術(shù)分析了EgMADS1基因的器官特異性表達(dá)情況。結(jié)果表明，該基因僅在雌蕊、胚珠表達(dá)。
　　3.EgMADS1基因遺傳轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建
　　為深入開(kāi)展EgMADS1基因的功能研究，用Gateway技術(shù)成功構(gòu)建該基因的