花生MADS-box基因保守序列的克隆與分析.pdf

1、本研究以花生品種閩花6號(hào)為研究對(duì)象，根據(jù)已知的花生MADS-box基因保守序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，以同源序列法分離克隆出花生MADS-box基因序列，研究了該基因家族的序列特征及進(jìn)化關(guān)系，為花生高產(chǎn)基因工程的開(kāi)展奠定基礎(chǔ)。 本研究根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期得到的并已登錄Genebank的兩條花生MADS-box全長(zhǎng)基因的保守序列，并拓展至豆科植物同源序列，設(shè)計(jì)了3條正向和3條反向引物，組合成5對(duì)簡(jiǎn)并引物，分別以花生各組織混合mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為

2、模板擴(kuò)增目的片段，得到長(zhǎng)度分別為520bp、644bp、433bp、557bp、448bp的目的片段，與預(yù)期的片段長(zhǎng)度相符；將這些目的片段克隆到pGEM-T載體上并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，共挑取26個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，通過(guò)對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行blast比對(duì)，結(jié)果表明26條測(cè)序片段與已知花生MADS-box基因同源度高達(dá)97％，遂將其DNA序列翻譯為氨基酸序列，并分析了這26條序列保守結(jié)構(gòu)域，分析表明所得到的序列具有MADS-box基因的兩個(gè)典型保守