眼鏡蛇毒灌胃后的兔血清對肝癌的抑瘤及促凋亡作用.pdf

1、　　目的：研究眼鏡蛇毒灌胃后的兔血清(the serum of rabbit taking orally cobra venom,SRCV)對肝癌的體內(nèi)外抑瘤作用和誘導凋亡作用,并評價其安全性。
　　實驗方法：根據(jù)血清藥理學方法,制備SRCV,以人肝癌HepG-2細胞及正常人胚肺成纖維細胞為靶細胞,以小鼠肝癌移植瘤為動物模型,通過臺盼藍拒染實驗、在體抑瘤實驗、流式細胞儀分析、電鏡觀察、TUNEL測試等實驗方法,觀察該制劑對肝癌的體

2、內(nèi)外抑瘤及在體促凋亡作用。通過急性毒性實驗和半數(shù)有效量測定評價其安全性。
　　實驗結(jié)果：1)高、低劑量SRCV各組的細胞毒作用均顯著強于同濃度正常血清(P<0.01),其中5mg/ml劑量組的增殖抑制率均高于5μg/ml阿霉素(P<0.01)；而高劑量SRCV的抑制率略高于同濃度低劑量SRCV,但無統(tǒng)計學顯著性。同時,高劑量SRCV(5mg/ml)有顯著的抗腫瘤細胞增殖作用,其作用與15μg/ml阿霉素相近。2)SRCV及正常兔血

3、清各劑量組對人胚肺成纖維細胞有不同程度促進細胞增殖的作用,而前者促進細胞增殖的作用更強,其中1、2、5mg/ml劑量組與同濃度正常兔血清比較具統(tǒng)計學差異(P<0.05)。3)急性毒性實驗結(jié)果,SRCV的急性毒性最小,經(jīng)酸熱處理后蛇毒的毒性比眼鏡蛇毒原毒也有所下降,其LD50均有非常顯著性差異(P<0.01)。以三者LD1的1/3量給藥進行的抑瘤實驗,均有顯著抑瘤作用(P<0.01),其中SRCV的抑瘤率最高,經(jīng)酸熱處理后蛇毒的抑瘤效果與

4、原毒相似。SRCV的半數(shù)有效量測定結(jié)果及其相對毒性參數(shù),說明它的相對毒性較低。4)流式細胞儀分析及TUNEL測試表明SRCV使小鼠肝癌移植瘤的凋亡率顯著升高,而電鏡下觀察可見典型凋亡細胞,光鏡下觀察TUNEL處理的組織切片也可見凋亡細胞。根據(jù)上述實驗結(jié)果。
　　結(jié)論：1)SRCV對腫瘤細胞具高度選擇性抑制作用,且其細胞毒作用與抑制腫瘤細胞的增殖有關(guān)；而對正常增殖細胞,不但不抑制,還能促進細胞增殖。2)SRCV較原毒的毒性降低,但仍