蝎神經(jīng)性毒素ANEP、AGAP的原核表達(dá)及毒力測定.pdf

1、由于人類不合理的經(jīng)營，常常導(dǎo)致森林病蟲害周期性大發(fā)生，不僅給林業(yè)生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且還威脅著生態(tài)平衡。在森林害蟲防治中以往多采用化學(xué)藥劑，長期使用化學(xué)防治不僅導(dǎo)致害蟲產(chǎn)生耐藥性，而且用藥量越來越大，形成惡性循環(huán)，對自然生態(tài)平衡造成嚴(yán)重的破壞，直接威脅著人、畜的安全，同時(shí)也增加了防治難度和資金的投入。
　　抗病蟲基因工程的發(fā)展為防治病蟲害開辟了一條新途徑，對于植物的保護(hù)作用具有持續(xù)性，大大降低了病蟲害的抗藥性和對環(huán)境的污染，

2、有效維護(hù)了生物多樣性和生態(tài)平衡。
　　本文對東亞鉗蝎昆蟲毒素ANEP、AGAP在大腸桿菌BL-21中的最佳表達(dá)條件以及兩種蝎神經(jīng)性毒素實(shí)驗(yàn)室毒力測定進(jìn)行研究，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.重組蛋白ANEP的理論分子量為15169.572 Da，Ala、，Cys、Gly和Thr分別占31.25％、13.02％、29.68％、26.04％; AGAP的理論分子量為15786.402 Da，其中Ala占30.3％，Cys占15.15

3、％，Gly占28.78％，Thr占25.75％。
　　2.利用瓊脂糖凝膠電泳對重組菌進(jìn)行篩選，得到分布在標(biāo)準(zhǔn)DNA片斷100bp到250bp之間的擴(kuò)增基因條帶，重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌體中。
　　3.通過均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，得出蝎神經(jīng)性毒素ANEP最佳表達(dá)條件為:表達(dá)時(shí)間6h，誘導(dǎo)物濃度1mmol/L，菌液比例1:50，菌液OD值0.7;得出蝎神經(jīng)性毒素AGAP的最佳表達(dá)條件為:表達(dá)時(shí)間6h，誘導(dǎo)物濃度0.5mmol/L，菌液比例

4、1:100，菌液OD值0.5。
　　4.蝎神經(jīng)性毒素ANEP200倍稀釋液對于分月扇舟蛾，榆紫葉甲，落葉松毛蟲的校正死亡率分別為84.48％，79.31％，83.05％;蝎神經(jīng)性毒素AGAP200倍稀釋液對于分月扇中蛾，榆紫葉甲，落葉松毛蟲的校正死亡率分別為82.76％，68.97％，81.36％。
　　5.2種蝎神經(jīng)性毒素重組蛋白對3種森林害蟲均具有一定的殺蟲效果，但ANEP殺蟲效果均好于AGAP。AGAP對分月扇舟蛾的效