NKT細(xì)胞在小鼠胚胎著床期母胎免疫耐受中作用的初步研究.pdf

1、目的:
　　 探究著床前后母體子宮蛻膜內(nèi)T淋巴細(xì)胞的變化；通過(guò)刺激NKT細(xì)胞的增殖活化,檢測(cè)其分泌的細(xì)胞因子變化,分析其在母體子宮內(nèi)膜免疫微環(huán)境中的調(diào)節(jié)作用,以探明NKT細(xì)胞活化與胚胎著床的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1、用免疫組化法觀察T細(xì)胞在圍著床期小鼠子宮組織中的定位；
　　 2、用淋巴細(xì)胞分離液分離小鼠外周血單核淋巴細(xì)胞；
　　 3、通過(guò)腹腔注射不同濃度的抗原α-GalCer刺激NKT細(xì)胞

2、活化,用RT-PCR法半定量檢測(cè)NKT細(xì)胞活化后外周血單核細(xì)胞和子宮蛻膜組織中的IL-4,IFN-Y分泌的變化；
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫組化結(jié)果顯示在妊娠D1、D2、D3、D4天小鼠子宮內(nèi)膜僅有少量CD3在T細(xì)胞膜上表達(dá)；妊娠D5天小鼠子宮內(nèi)膜CD3表達(dá)量明顯增多,并且達(dá)到高峰；妊娠D6天小鼠子宮內(nèi)膜CD3表達(dá)量下降；
　　 2、腹腔注射不同濃度(0、10.3、20.6、41.2ug/ml)的抗原α-Gal

3、Cer組中,用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同組別外周血單核淋巴細(xì)胞和子宮蛻膜中IFN-γ的mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組各組中IFN-γ的mRNA表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組,差異有顯著性(P<0.05)；而不同濃度藥物的實(shí)驗(yàn)組間IFN-γ的mRNA表達(dá)量差異無(wú)顯著性(P>0.05)；
　　 3、腹腔注射不同濃度(0、10.3、20.6、41.2ug/ml)的抗原α-GalCer組中,用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同組別外周血單核淋巴細(xì)胞和子宮蛻

4、膜中IL-4的mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示在外周血單核淋巴細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組各組中IL-4的mRNA表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組,差異有顯著性(P<0.05)；不同濃度藥物的實(shí)驗(yàn)組間IL-4的mRNA表達(dá)量差異無(wú)顯著性(P>0.05)。而在子宮內(nèi)膜,劑量為20.6ug/ml組IL-4的mRNA表達(dá)較其他組明顯升高,差異有顯著性(P<0.05)；其他各組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；
　　 4、通過(guò)分析外周血單核細(xì)胞和子宮內(nèi)膜IFN-γ/IL-

5、4的相對(duì)光密度比值,結(jié)果顯示在外周血中10.3ug/ml、41.2ug/ml組IFN-γ/IL-4較空白組和20.6ug/ml組明顯降低(P<0.05),20.6ug/ml組與空白組相比,差異無(wú)顯著性(P>0.05)。而在子宮內(nèi)膜,10.3ug/ml、20.6ug/ml組IFN-γ/IL-4與空白組相比,明顯減少,差異有顯著性(P<0.05)；41.2ug/ml組IFN-γ/IL-4與空白組相比,差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
　

6、　 結(jié)論:
　　 1、CD3 T細(xì)胞在小鼠胚胎植入母體過(guò)程中增多,提示CD3 T細(xì)胞可能參與胚胎著床免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)；
　　 2、著床期子宮內(nèi)膜中活化的NKT細(xì)胞可能通過(guò)產(chǎn)生更多的IL-4使子宮蛻膜局部免疫反應(yīng)朝體液免疫應(yīng)答方向調(diào)節(jié)；
　　 3、著床期外周活化的NKT細(xì)胞使外周單核細(xì)胞中IFN-γ/IL-4向Th1漂移,而子宮內(nèi)膜中活化的NKT細(xì)胞使IFN-γ/IL-4的比值向Th2漂移,有利于局部子宮內(nèi)膜形成