同基因骨髓造血干細胞移植免疫重建誘導小鼠皮膚移植免疫耐受的初步研究.pdf

1、目的:
　　 探討小鼠異基因皮膚移植后接受清髓性預處理,通過受體同基因骨髓造血干細胞移植重建免疫系統(tǒng)誘導皮膚移植物免疫耐受的可行性。
　　 方法:
　　 1、建立皮膚移植模型:受體雌性BALB/c小鼠隨機分為2組,A:同基因移植組,BALB/c-BALB/c;B:異基因移植組,C57BL/6-BALB/c。通過觀察移植皮膚形態(tài)變化及成活時間驗證皮膚移植模型的可靠性。
　　 2、建立免疫重建模型:受體雌性B

2、ALB/c小鼠隨機分為3組,A:空白對照組;B:全身照射(TBI)組;C:TBD-骨髓移植(BMT)組。受體小鼠接受致死劑量直線加速器射線全身照射,TBI后4～6小時內經(jīng)尾靜脈注射供體雄性BALB/c小鼠骨髓細胞。通過觀察TBI后各組小鼠一般情況變化和存活時間,檢測外周血白細胞及血小板計數(shù),脾細胞對刀豆蛋白A(ConA)的增殖反應能力,PCR檢測受體內性別決定基因Sry基因初步檢測免疫重建水平。
　　 3、同基因骨髓造血干細胞移

3、植免疫重建誘導皮膚移植免疫耐受:受體雌性BALB/c小鼠隨機分為4組,A:移植對照組;B:環(huán)孢霉素A(CsA)組;C:CsA+TBI組;D:CsA+TBI+BMT組。受體BALB/c小鼠接受供體C57BL/6小鼠皮肽移植,皮膚移植當天至術后第7天每天腹腔注射CsA,第8天接受致死劑量的直線加速器射線個身照射,4～6小時內通過尾靜脈注射受體同基順骨髓細胞。通過記錄皮膚移植物存活時間、觀察皮膚移植物HE染色組織學改變、單向混合淋巴細胞反應(

4、MLR)檢測免疫耐受的效應;TBI后記錄小鼠生存率及外周血白細胞計數(shù)檢測免疫重建情況。
　　 結果:
　　 1、同基因移植組,除1例皮膚移植物因抓咬死亡,其余存活良好;異基因移植組,除1例皮膚移植物在術后7天因皮下淤血死亡,其余在9～14天內因排斥反應死亡,兩組手術成功率為93.33%。
　　 2、B組小鼠在TBI后12天內全部死亡,而C組小鼠除1只于TBI后第6天死亡,其余長期存活,其白細胞數(shù)與血小板數(shù)在TBI

5、后第7天均降到最低,之后持續(xù)性增高,第21天時白細胞數(shù)與A組比較無顯著差異(P＞0.05),而血小板數(shù)達到正常值水平;第21天時C組淋巴細胞對ConA增值反應能力與A組比較無顯著差異(P＞0.05);第28天時C組體內均能檢測到Sry基因。
　　 3、存活時間:A、B組未接受TBI均存活良好,C組小鼠在TBI后6～10天內全部死亡,而D組小鼠在觀察期間存活良好;外周血白細胞計數(shù):C組白細胞數(shù)呈持續(xù)性降低直到全部死亡,D組于TBI

6、后第6天時降至最低點,之后持續(xù)上升,于第18天達到B組水平;皮膚成活時間:D組移植皮膚平均存活時間為34.9天,顯著長于各對照組(P＜0.01);病理學結果:B組移植皮片有大量淋巴細胞浸潤,組織結構不清,C、D組未見明顯急性排斥反應,淋巴細胞浸潤較少,組織結構清晰;混合淋巴細胞反應:D組小鼠脾細胞對供體小鼠脾細胞增殖反應顯著降低,而對第三方小鼠脾細胞增殖反應與A組和B組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結論: