骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)腎移植免疫耐受的臨床初步研究.pdf

1、背景：腎移植是目前治療終末期腎病最有效的方法，但移植后需長(zhǎng)期服用免疫抑制劑。免疫抑制劑并不能完全避免排斥反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)增加了患者經(jīng)濟(jì)、心理負(fù)擔(dān)，也增加了感染、腫瘤等發(fā)生機(jī)會(huì)，因此尋找一種減少甚至停用免疫抑制劑的有效辦法是廣大醫(yī)患人員的迫切需要。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）因其組織修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等特性在移植免疫耐受的應(yīng)用中受到人們的重視，成為免疫治療中最有前景的一類細(xì)胞，目前國(guó)內(nèi)外已有大量的

2、體外及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)了MSCs在移植免疫耐受中的作用，但缺乏相關(guān)的臨床實(shí)驗(yàn)，且輸注MSCs的方式、劑量、時(shí)間點(diǎn)都尚無(wú)定論，要達(dá)到理想的耐受狀態(tài)仍面臨巨大的挑戰(zhàn)。
　　 目的：通過在腎移植術(shù)中經(jīng)移植腎動(dòng)脈及術(shù)后經(jīng)靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，術(shù)后減少免疫抑制劑用量。觀察一般情況、尿量、排斥反應(yīng)發(fā)生率、移植腎存活率，監(jiān)測(cè)腎功能、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等，探討輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受的作用和機(jī)制及減少免疫抑制劑劑量的可行性。
　　

3、 方法：隨機(jī)選擇2009-9-1至2009-12-31期間我中心擬行親屬活體供腎移植的6例慢性腎功能不全（尿毒癥期）患者，隨機(jī)分為輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組及不輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的照組。MSCs來自第三方健康供體自愿捐獻(xiàn)的骨髓，經(jīng)嚴(yán)格無(wú)菌分離、純化、擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)組于活體腎移植手術(shù)過程中在移植腎動(dòng)脈吻合口固定一留置針，開放移植腎血流時(shí)，經(jīng)移植腎動(dòng)脈以輸血器加壓快速輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞5×106個(gè)，術(shù)后1月經(jīng)外周靜脈輸注第二次骨髓間充質(zhì)干

4、細(xì)胞2×106/kg，術(shù)后長(zhǎng)期使用低劑量口服免疫抑制劑他克莫司（FK506）0.05mg·kg-1·d-1，嗎替麥考酚酯（MMF）20mg·kg-1·d-1，強(qiáng)的松15mg/天，對(duì)照組服用標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫抑制劑，F(xiàn)K5060.08mg·kg-1·d-1，MMF20mg·kg-1·d-1，強(qiáng)的松15mg/天。密切觀察術(shù)后可能發(fā)生的并發(fā)癥及移植腎功能恢復(fù)情況，監(jiān)測(cè)腎功能、肝功能、血常規(guī)、FK506濃度等臨床指標(biāo)，檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群、混合淋巴細(xì)胞反

5、應(yīng)、細(xì)胞因子等了解受體免疫狀態(tài)。
　　 結(jié)果：6例患者手術(shù)過程順利，對(duì)照組中1例于術(shù)后第7天發(fā)生移植腎區(qū)脹痛、無(wú)尿及血肌酐升高，移植腎彩超示移植腎周血腫，臨床診斷為移植腎急性排斥反應(yīng)，經(jīng)甲強(qiáng)龍0.25g連續(xù)3天，ATG100mg連續(xù)5天治療后逆轉(zhuǎn)，腎功能恢復(fù)正常。對(duì)照組:術(shù)后1月血肌酐平均88umol/L，術(shù)后3月平均100umol/L。3月內(nèi)未出現(xiàn)移植腎栓塞、感染、移植物抗宿主病等并發(fā)癥。 Treg比例術(shù)前平均5.04％，術(shù)后

6、1月平均2.53％。CD19+CD5+B淋巴細(xì)胞比例術(shù)前平均28.61％，術(shù)后1月平均29.72％。CD19+CD27+B淋巴細(xì)胞比例術(shù)前平均60.6％，術(shù)后平均47.29％。NK細(xì)胞比例術(shù)前平均2.66％，術(shù)后平均5.59％?；旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)刺激指數(shù)術(shù)前平均0.125，術(shù)后平均0.3399。PMA刺激的TNF-α術(shù)前平均51.16％，術(shù)后1月平均36.14％。IFN-γ術(shù)前平均31.59％，術(shù)后1月平均22.51％。IL-10術(shù)前平均

7、1.81％，術(shù)后1月平均5.93。IL-4術(shù)前平均0.48％，術(shù)后1月1.98％。實(shí)驗(yàn)組:術(shù)中、術(shù)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸注過程順利，移植腎功能恢復(fù)良好。術(shù)后1月血肌酐平均131.3umol/L,術(shù)后3月平均134 umol/L。移植過程中、移植后未發(fā)生栓塞、感染、移植物抗宿主病等并發(fā)癥，未發(fā)生移植腎排斥。實(shí)驗(yàn)組Treg比例術(shù)前平均5.78％，術(shù)后1月平均5.29％，其中兩例術(shù)后較術(shù)前增加，高于對(duì)照組。CD19+CD5+B淋巴細(xì)胞術(shù)前平均2

8、5.51％，術(shù)后1月平均18.73％，較對(duì)照組減少。CD19+CD27+B淋巴細(xì)胞比例術(shù)前平均28.85％，術(shù)后平均36.86％，對(duì)照組則降低。 NK細(xì)胞比例術(shù)前平均10.1％，術(shù)后平均8.38％，對(duì)照組升高?；旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)刺激指數(shù)術(shù)前平均0.1003，術(shù)后1月平均0.185，明顯低于對(duì)照組。PMA刺激的實(shí)驗(yàn)組TNF-α術(shù)前平均47.78％，術(shù)后平均46.83％，其中兩例術(shù)后增加，對(duì)照組則降低。IFN-γ術(shù)前平均27.51％，術(shù)后1月