2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:體外觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)對特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+T細(xì)胞比例以及T細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10功能的影響,并探討上述兩種調(diào)控作用之間的相關(guān)性,旨在探究MSCs調(diào)節(jié)ITP免疫平衡及誘導(dǎo)自身免疫耐受的機(jī)制,從而為ITP的臨床治療奠定初步的實驗基礎(chǔ)。 方法:采用Ficoll分離骨髓單個核細(xì)胞,通過體外培養(yǎng),擴(kuò)增出MSCs,并通過形態(tài)學(xué)特征及流式細(xì)胞術(shù)檢測其表面標(biāo)志加

2、以鑒定;通過Ficoll分離法和尼龍棉柱法獲取正常人及ITP患者外周血T淋巴細(xì)胞,并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞比例;MSCs經(jīng)絲裂霉素MMC處理后按不同數(shù)量(2×103、1×104、5×104個細(xì)胞/孔)接種培養(yǎng)板作為基底層細(xì)胞,然后分別接種體外分離純化的異體ITP及正常人T淋巴細(xì)胞,于2d、4d、6d后各自收集T淋巴細(xì)胞及培養(yǎng)上清,采用EI.ISA測定T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-2、IFN-γIL-4、IL-10

3、水平;并用流式細(xì)胞術(shù)檢測接種于骨髓MSCs的ITP患者CD4+CD25+T細(xì)胞比例。 結(jié)果:分離培養(yǎng)的骨髓MSCs貼壁生長呈梭形,原代細(xì)胞呈集落分布,10d左右達(dá)到融合,傳代細(xì)胞保持原代細(xì)胞的形態(tài)且增殖速度加快,6~7d即可達(dá)到融合;經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測骨髓MSCs高表達(dá)CD29、CD105、CD166,低表達(dá)CD34、CD45、HLA-DR,3代以后的細(xì)胞中MSCs純度達(dá)到95%以上;尼龍棉柱法分離的T淋巴細(xì)胞純度可達(dá)到70%~8

4、0%左右。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果,ITP患者外周血CD4+CD25+T細(xì)胞數(shù)量及CD4+CD25+7CD4+比值均明顯低于正常對照組(P<0.05);在PHA作用下,數(shù)量>1x104的骨髓MSCs與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)4d后,與正常對照組相比,MSCs可顯著上調(diào)ITP患者及正常人T淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞比例及CD4+CD25+/CD4+比值(P<0.05),且隨MSCs量的增加,作用增強(qiáng)(P<0.05)。本研究未檢測到骨髓MSC

5、s本身分泌IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10。在PHA作用下,ITP患者T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ較正常人高(P<0.05),IL-4、IL-10較正常人低(P<0.05)。骨髓MSCs與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后,與對照組相比,MSCs可顯著抑制ITP患者或正常人T淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ(P<0.05),且隨MSCs數(shù)量增加,抑制作用增強(qiáng)(P<0.05),共培養(yǎng)4d、6d其抑制作用明顯強(qiáng)于2d(P<0.05)

6、;MSCs可促進(jìn)ITP患者T淋巴細(xì)胞分泌IL-4、IL-10(P<0.05),且隨MSCs數(shù)量增加,促進(jìn)作用增強(qiáng)(P<0.05);MSCs對IL-4的作用與培養(yǎng)時間無顯著相關(guān)性(P>0.05),但對IL-10促進(jìn)作用隨時間延長而增強(qiáng)(P<0.05);當(dāng)MSCs數(shù)量>1×104可促進(jìn)正常人T淋巴細(xì)胞分泌IL-4(P<0.05),且隨MSCs數(shù)量增加,促進(jìn)作用增強(qiáng)(P<0.05),共培養(yǎng)4d、6d作用明顯強(qiáng)于2d(P<0.05);MSCs可

7、促進(jìn)正常人T淋巴細(xì)胞分泌IL-10(P<0.05),且隨MSCs數(shù)量增加,促進(jìn)作用增強(qiáng)(P<0.05),共培養(yǎng)4d、6d其促進(jìn)作用明顯強(qiáng)于2d(P<0.05)。體外骨髓MSCs對ITP患者T淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10具有調(diào)控作用,同時對CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞具有上調(diào)作用,以上這種機(jī)制可使ITP患者的細(xì)胞因子及CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞逐漸接近于正常人但仍達(dá)不到正常人水平(P<0.05)。 結(jié)論

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