天花粉中總皂苷提取工藝及乙酸乙酯部位活性篩選研究.pdf

1、目的:
　　1.天花粉，來(lái)源于葫蘆科栝樓屬植物栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim.）或雙邊栝樓(T.rosthornii Harms)的干燥塊根，其中的總皂苷可用于治療缺血性腦血管疾病。為了提升天花粉總皂苷的提取工藝，本文采用響應(yīng)面優(yōu)化方法，從而為其工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　2.前期研究表明，天花粉乙酸乙酯部位具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用，本文擬對(duì)天花粉乙酸乙酯部分進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，并從中篩

2、選出對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用的化合物。
　　方法:
　　1.在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取料液比、提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取溫度為自變量，以天花粉總皂苷提取率為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Benhnken中心組合設(shè)計(jì)原理，采用四因素三水平的響應(yīng)面分析法確定最佳提取工藝。
　　2.將天花粉粉碎(38 kg)，用甲醇進(jìn)行回流提取，濃縮，依次用石油醚，乙酸乙酯進(jìn)行萃取。采用硅膠、C18以及半制各高效液相色譜等多種分離技術(shù)

3、，對(duì)天花粉乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離，并利用1H-NMR、13C-NMR及MS等分析方法對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。接著，采用MTT法對(duì)分離得到的化合物（除7外）進(jìn)行體外細(xì)胞活性研究，探究其對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型的影響。
　　結(jié)果:
　　1.天花粉總皂苷的最佳提取工藝為料液比1∶15，提取時(shí)間120 min，乙醇體積分?jǐn)?shù)48％，提取溫度88℃，提取2次，總皂苷提取率可達(dá)0.93％。
　　2.從天花粉的乙酸乙酯

4、部位共分離得到14個(gè)化合物分別為:1個(gè)腦苷脂:soya-cerebrosideⅠ(1);1個(gè)木脂素:ligballinol(2);2個(gè)甾體皂苷:(22E，24R)-24-ethylcholesta-22-en-3-O-β-D-glucoside(3),stigmastanol glucoside(4);4個(gè)葫蘆素類(lèi)三萜:hemslecin A(5)，cucurbitacin R(6)，cucurbitacin D(7)，cucurbit

5、acin B(8);6個(gè)長(zhǎng)鏈脂肪酸:hexadecanoic acid(9)，pentandecane(10), behenic acid(11), n-octacos-9-enoic aid(12),9(Z),12(Z)-nonadecadienoic acid(13),(10E,13E)-octadeca-10，13-dienoic acid(14)。細(xì)胞活性篩選中，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，僅10μmol/L的1和0.1μmol/L的2

6、給藥后，細(xì)胞存活率與給藥組有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.本文優(yōu)化的天花粉總皂苷提取工藝穩(wěn)定可行，實(shí)驗(yàn)真實(shí)值與建立的模型預(yù)測(cè)值基本一致。
　　2.從天花粉中分離得到的14個(gè)化合物，其中8個(gè)化合物（木脂素2，甾體皂苷3、4，葫蘆素類(lèi)三萜5，長(zhǎng)鏈脂肪酸10、11、12、13）為首次從栝樓屬中分離得到，長(zhǎng)鏈脂肪酸9和14為天花粉中首分。除此，本文首次從栝樓屬分離得到木脂素類(lèi)化合物(2)。細(xì)胞活性篩選結(jié)果表明，10μmol