阻斷孤啡肽受體對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的防治作用.pdf

1、孤啡肽受體（Orphanopioid-likereceptor.ORL-1）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性阿片肽受體，廣泛分布于中樞和外周組織，參與機(jī)體的多種生理活動(dòng)。孤啡肽（orphanin-FQ，OFQ）是目前發(fā)現(xiàn)的孤啡肽受體唯一的內(nèi)源性配基，在機(jī)體中發(fā)揮著重要的功能。文獻(xiàn)顯示,機(jī)體在腦缺血再灌注后孤啡肽（OFQ）的含量有明顯的升高，并通過(guò)其受體ORL-1抑制缺血再灌注后局部腦神經(jīng)元的興奮性，且對(duì)局部神經(jīng)元遞質(zhì)的釋放、局部的腦血流變化等

2、均能產(chǎn)生明顯的影響。據(jù)此，有學(xué)者推測(cè)OFQ/ORL1系統(tǒng)可能在缺血性腦損傷中發(fā)揮著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)在SD大鼠局灶性腦缺血模型（MCAO）的基礎(chǔ)上，通過(guò)側(cè)腦室給藥的方法，觀察了不同劑量及不同時(shí)間點(diǎn)給予孤啡肽受體阻斷劑（Nphe）對(duì)局灶性腦缺血神經(jīng)元損傷的影響，初步探討了OFQ/ORL1系統(tǒng)在缺血再灌注神經(jīng)元損傷中的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制，為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)一
　　不同劑量的Nphe預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血神經(jīng)元損

3、傷的保護(hù)作用
　　目的：研究給予不同劑量的孤啡肽受體阻斷劑Nphe預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。
　　方法：體重280-320g的雄性SD大鼠78只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（S組）、對(duì)照組(C組)和四個(gè)不同劑量的給藥組（T0.03、T0.3、T3、T30），每組大鼠13只，其中每組大鼠隨機(jī)分為兩部分，其中10只在缺血再灌注后24h行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分（NDS評(píng)分）和腦梗死容積的測(cè)量，余下3只在缺血再灌注后24h斷頭處死，W

4、estern-Blot檢測(cè)caspase-3在海馬和紋狀體的表達(dá)。C和T組均采用線栓法阻斷大腦中動(dòng)脈實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型（MCAO），缺血2h后恢復(fù)再灌注，S組完成與C組相同的手術(shù)操作但不置入尼龍線，T組分別于術(shù)前45min右側(cè)腦室注射孤啡肽受體阻斷劑Nphe0.03nmol、0.3nmol、3nmol和30nmol/10ul，S組和C組于手術(shù)前相同時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室給予相同容量的生理鹽水。
　　結(jié)果：NDS評(píng)分缺血再灌注后24h神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分

5、結(jié)果顯示：S組動(dòng)物的NDS評(píng)分正常，C組和T0.03組大鼠NDS評(píng)分顯著下降，二組間無(wú)明顯差異（P>0.05）；T0.3、T3和T30組大鼠的NDS評(píng)分明顯提高，與C組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中T3組和T30效果更為明顯，T3、T30與T0.3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　腦梗死容積S組未見梗死，C組（40.23±7.25％）和T0.03組（39.88±5.55％）梗死面積明顯高于T0.3組（28.4

6、7±5.89％）、T3組（21.08±5.71％）和T30組(19.98±5.27％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明側(cè)腦室給予0.3nmol、3nmol和30nmol的孤啡肽受體阻斷劑Nphe能夠減輕缺血再灌注后的神經(jīng)元損傷，其中T3和T30組的效果更為明顯，但二組之間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），此與行為學(xué)評(píng)分的結(jié)果比較相一致。
　　Western-blot結(jié)果顯示：腦缺血再灌注24h后，C組和T0.03組大鼠海馬和

7、紋狀體組織Caspase-3蛋白的表達(dá)較其它各組顯著升高，T0.3、T3和T30組大鼠的Caspase-3表達(dá)雖明顯受到抑制，但仍明顯高于S組。
　　實(shí)驗(yàn)二
　　不同時(shí)間點(diǎn)給予Nphe對(duì)缺血再灌注大腦神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用
　　目的：研究在缺血或缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)給予孤啡肽受體阻斷劑Nphe對(duì)神經(jīng)元損傷的影響
　　方法：體重280-320g的雄性SD大鼠45只，采用線栓法阻斷大腦中動(dòng)脈實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型（MCAO），

8、隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)和4個(gè)處理組（T組）,處理組于缺血后1h（T1h組）、再灌注后1h（T1H組）、4h（T4H組）、12h（T12H組）四個(gè)時(shí)間點(diǎn)側(cè)腦室給予孤啡肽受體阻斷劑（Nphe）3nmol/10ul,各組均于缺血2h后恢復(fù)再灌注。所有組別大鼠隨機(jī)分為兩部分，6只在恢復(fù)再灌注后24h時(shí)，完成行為學(xué)評(píng)分后斷頭處死并計(jì)算腦梗死容積；其余3只在再灌注后24h斷頭處死，0℃下分離紋狀體組織，Western-Blot半定量分析Caspas

9、e-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：NDS評(píng)分與對(duì)照C組相比，缺血再灌注后24小時(shí),T1h、T1H組的行為學(xué)評(píng)分明顯提高，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P<0.05）；T4H組評(píng)分較C組有所提高，但組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；T12H組與C組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　腦梗死容積T1h組(26.32±6.75％)、T1H組(30.38±6.06％)的梗死容積明顯小于C組（42.22±8.29％），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.

10、05）。T4H組（36.00±9.60％）和T12H組（39.79±8.40％）的梗死容積較C組有所減小，但統(tǒng)計(jì)分析無(wú)差異（P>0.05）。
　　Western-Blot結(jié)果顯示：缺血再灌注24小時(shí)后，T1h、T1H組的Caspase-3蛋白的表達(dá)較C組明顯受到抑制，且明顯低于T4H、T12H組。
　　結(jié)論：1.預(yù)處理給予不同劑量的Nphe能夠明顯減輕缺血再灌注后的神經(jīng)元損傷，發(fā)揮缺血再灌注后的神經(jīng)元保護(hù)作用，且存在一定的劑