β-七葉皂甙鈉對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：腦血管疾病是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病，其中缺血性腦血管疾病又占較高比例，約60～80％[1]。缺血性腦血管疾病的病理生理改變尤以腦缺血-再灌注損傷是目前國內(nèi)外研究的重點課題之一。本實驗通過模擬臨床缺血性腦血管疾病的發(fā)病過程，采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血-再灌注模型，觀察腦缺血-再灌注后大鼠神經(jīng)功能、自由基、一氧化氮(Nitricoxide，NO)和炎癥反應(yīng)的變化，以及β-七葉皂甙鈉對上述指標(biāo)的影響，以研究腦缺血-再灌注損傷的發(fā)病

2、機制和β-七葉皂甙鈉對局灶性腦缺血-再灌注損傷后的保護作用，探討防治腦缺血損傷的更多可行的途徑和方法。 方法：將健康雄性Wistar大鼠60只隨機分為4組：即假手術(shù)組、缺血-再灌注組、β-七葉皂甙鈉低劑量治療組和高劑量治療組，每個組又分為缺血2h后再灌注6h、12h、24h三個時間點，每個時間點觀察5只大鼠。用栓線阻塞大鼠右側(cè)大腦中動脈(Middlecerebralartery，MCA)制成腦缺血模型，缺血2h后將栓線拔出即形成

3、缺血-再灌注。假手術(shù)組除了不插入栓線以外，手術(shù)過程同缺血-再灌注組和治療組，其目的是為了觀察手術(shù)過程對炎癥反應(yīng)和自由基產(chǎn)生等是否有影響。治療組在缺血-再灌注即刻腹腔注射β-七葉皂甙鈉，低劑量和高劑量分別為10mg/kg和20mg/kg，假手術(shù)組和缺血-再灌注組腹腔注射等體積生理鹽水，術(shù)后2h進行模型成功評價，分別于術(shù)后6h、12h、24h進行神經(jīng)功能損害評分。在術(shù)后各相應(yīng)時間點對大鼠進行斷頭取腦，并觀察有無蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦出血等情況。

4、將腦組織按冠狀面均勻切成2mm厚的腦片，以制成病理切片和腦組織勻漿。用比色法測定手術(shù)后不同時間點腦組織超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)含量、丙二醛(Malondiadehyde，MDA)和NO含量；用放射免疫法測定手術(shù)后不同時間點腦組織細(xì)胞因子含量，包括白細(xì)胞介素IL-1β(Interleukin-1beta，IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-alpha，TNF-α)

5、；將假手術(shù)組和缺血-再灌注模型大鼠腦組織大體標(biāo)本進行氯化-2，3，5-三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色，觀察腦組織梗死面積，并可判斷模型制作是否成功；用部分腦組織片制作病理切片行HE染色，光鏡觀察手術(shù)后不同時間點腦組織病理改變。 結(jié)果：假手術(shù)組相應(yīng)時間點神經(jīng)功能損害評分顯著低于缺血-再灌注組和治療組(P＜0.05)，β-七葉皂甙鈉低劑量治療組和高劑量治療組神經(jīng)功能損

6、害評分與缺血-再灌注組各相應(yīng)時間點比較明顯降低(P＜0.05)，高劑量治療組神經(jīng)功能損害評分與低劑量治療組比較，無顯著性差異(P＞0.05)；缺血-再灌注組和治療組SOD含量顯著低于假手術(shù)組相應(yīng)時間點SOD含量(P＜0.05)，治療組SOD含量明顯高于缺血-再灌注組各時間點SOD含量(P＜0.05)，高劑量治療組各時間點SOD含量明顯升高，與低劑量治療組比較，具有顯著性差異(P＜0.05)，治療組內(nèi)各時間點之間比較SOD含量有顯著性差異

7、，12h開始升高，24h達高峰；假手術(shù)組相應(yīng)時間點MDA、NO和IL-1β和TNF-α含量明顯低于缺血-再灌注組和治療組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，治療組與缺血-再灌注組相應(yīng)時間點各指標(biāo)含量比較明顯降低(P＜0.05)，高劑量治療組與低劑量治療組各相應(yīng)時間點比較各指標(biāo)含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。大鼠局灶性腦缺血-再灌注模型TTC染色正常腦組織呈紅色，梗死灶呈白色；光鏡顯示假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)未見明顯病理改變

8、，腦缺血-再灌注組神經(jīng)細(xì)胞缺血壞死，細(xì)胞水腫明顯，膠質(zhì)細(xì)胞彌漫增生，炎性細(xì)胞浸潤；應(yīng)用β-七葉皂甙鈉干預(yù)治療，上述病理改變有不同程度改善，細(xì)胞水腫及壞死程度減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少。 結(jié)論：腦缺血-再灌注后，大鼠缺血腦組織內(nèi)的MDA、NO、IL-1β和TNF-α的含量升高，SOD含量降低，腦水腫顯著，說明MDA、NO、IL-1β、TNF-α參與了腦缺血-再灌注損傷的病理生理過程。β-七葉皂甙鈉可以降低MDA、NO、IL-1β和TN