玉米乙二醛酶系統(tǒng)的基因組學(xué)分析及ZmGLYI-8基因的功能鑒定.pdf

1、隨著全球氣候的不斷變暖和土壤質(zhì)量下降，植物在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中受到非生物脅迫的影響不斷加劇。這些非生物脅迫最終通過(guò)水分、離子和活性氧等代謝障礙發(fā)揮作用。除了以上幾種典型的脅迫相關(guān)的代謝產(chǎn)物之外，還有一種以甲基乙二醛（Methylglyoxal，MG）為代表的醛酮類有毒代謝產(chǎn)物，它能通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA的修飾影響其結(jié)構(gòu)和功能，最終導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至死亡。為了降低MG對(duì)正常生長(zhǎng)發(fā)育的不利影響，植物自身進(jìn)化出降解MG的機(jī)制。其中，乙二醛酶系統(tǒng)

2、是主要的MG清除途徑，可以將甲基乙二醛轉(zhuǎn)化為乳酸，并由此參與植物的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控和脅迫防御。
　　本研究利用生物信息學(xué)的方法及手段，從玉米基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選三類乙二醛酶基因，并對(duì)各基因家族成員的結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、基因表達(dá)模式進(jìn)行系統(tǒng)分析。同時(shí)，利用同源基因克隆方法從玉米種質(zhì)POB21中克隆得到一個(gè)ZmGLYI-8基因，對(duì)該基因的序列、表達(dá)特性及其生物學(xué)功能進(jìn)行了系統(tǒng)分析。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）通過(guò)序列比對(duì)和結(jié)構(gòu)分析，從B

3、73基因組中篩選出13個(gè)乙二醛酶Ⅰ（GLYI）基因、3個(gè)乙二醛酶Ⅱ（GLYII）基因和7個(gè)乙二醛酶Ⅲ（GLYIII）基因。以擬南芥為參考基因組，對(duì)玉米乙二醛酶基因家族成員的序列同源性、基因結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域及染色體定位分析表明，三類乙二醛酶基因分屬不同家族，沒(méi)有進(jìn)化的一致性。同一家族內(nèi)部的乙二醛酶家族成員之間具有進(jìn)化保守性，但在進(jìn)化過(guò)程中倍增不同步。擬南芥和玉米基因組中不同乙二醛酶家族的基因倍增也有一定的物種偏好性。
　?。?）利

4、用genevestigator數(shù)據(jù)庫(kù)和定量PCR技術(shù)對(duì)玉米中乙二醛酶基因的表達(dá)特性進(jìn)行分析和驗(yàn)證。結(jié)果表明，三個(gè)基因家族的成員在玉米不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)有一定的偏好性，暗示該各家族基因成員在植物體內(nèi)的生物學(xué)功能各有分工。對(duì)GLYI和GLYII基因表達(dá)的組織特異性的qRT-PCR檢測(cè)表明，所有基因在根中的表達(dá)水平最低，大多數(shù)基因（9個(gè)GLYI，1個(gè)GLYII）在葉中的表達(dá)水平最高。在高溫、干旱、高鹽等不同非生物脅迫、代謝物MG和H2O2及激

5、素ABA、ET和MeJA處理后，基因表達(dá)調(diào)控的方向和表達(dá)水平表現(xiàn)出豐富的多樣性，說(shuō)明大多數(shù)乙二醛酶基因廣泛參與多種非生物脅迫響應(yīng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。
　?。?）利用同源克隆技術(shù)從POB21基因組中克隆得到的一個(gè)玉米ZmGLYI-8基因，對(duì)該基因序列進(jìn)行分析，結(jié)果表明該基因CDS全長(zhǎng)為1044bp，基因編碼蛋白全長(zhǎng)為347個(gè)氨基酸，等電點(diǎn)為6.49，預(yù)測(cè)分子量為38223.83Da。序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明，該基因與 B73基因組中