文昌魚谷丙轉(zhuǎn)氨酶組織定位及在LPS和溶藻弧菌處理后急性炎癥相關(guān)因子的變化.pdf

1、機(jī)體在受到外傷、炎癥和病原感染時，機(jī)體發(fā)生廣泛的生理反應(yīng)，反應(yīng)原激活機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，釋放兒茶酚胺(catecholamines，CAs)等一系列激素，從而引起機(jī)體的急性時相反應(yīng)(acute phase response，APR)。使機(jī)體產(chǎn)生急性時相蛋白(acute phase protein，APPs)等炎癥標(biāo)志物。 我們首先利用免疫組化和Western blotting方法，研究了AAT在文昌魚的組織表達(dá)和定位，首次在頭

2、索動物文昌魚中證明了AAT的存在，結(jié)果顯示，AAT定位于文昌魚肝盲囊的細(xì)胞漿內(nèi)，從AAT在文昌魚中的合成部位來看，在功能上文昌魚的肝盲囊等同于脊椎動物肝臟，肝盲囊是在發(fā)育分化過程中消化道組織向右前方突出沿著咽后部向前擴(kuò)展和延伸形成的一個囊袋狀結(jié)構(gòu)。長期以來，文昌魚的肝盲囊被認(rèn)為是脊椎動物肝臟的前體，支持了由Muller最早提出的脊椎動物的肝臟是由文昌魚肝盲囊進(jìn)化而來的觀點(diǎn)。 第二，我們用生物化學(xué)方法，選取典型的炎性刺激因子-LP

3、S來感染文昌魚，探討了文昌魚體液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，AAT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase，AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(r-Glutamyltransferase，GGT)、乳酸脫氫酶(Lactare dehydrogenase，LDH)、羥丁酸脫氫酶(α-HydroxybutyrateDehydrogenase，HBDH)、視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol Bindi

4、ng Protein，RBP)和堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)七種炎性蛋白的急性時相反應(yīng)，其中，首次在文昌魚體液中發(fā)現(xiàn)了AAT、AST、GGT、LDH、HBDH和RBP六種炎性蛋白存在，并發(fā)現(xiàn)，LPS感染文昌魚后，在不同時間文昌魚體液中所含七種蛋白呈現(xiàn)了各自不同的變化趨勢，總蛋白濃度在整個實(shí)驗(yàn)期內(nèi)保持了基本恒定的水平，而AAT、AST、GGT、LDH、HBDH和ALP六種蛋白在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)總體呈上升的趨勢，

5、其濃度均明顯增加，呈正急性時相反應(yīng)；而RBP實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)總體呈下降的趨勢，呈負(fù)急性時相反應(yīng)。這都表明：無論正急性時相蛋白還是負(fù)急性時相蛋白，在文昌魚體內(nèi)都呈現(xiàn)了類似高等哺乳動物急性時相反應(yīng)特點(diǎn)。因此，我們認(rèn)為類似哺乳類具有的急性時相反應(yīng)體系已經(jīng)存在于頭索類動物中了。 第三，我們用生物化學(xué)方法，選取海洋中廣泛存在、眾多水產(chǎn)動物的常見致病菌-溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)作為天然反應(yīng)原感染文昌魚，從另外一個角度探

6、討并豐富文昌魚體液中的八種炎性蛋白的急性時相反應(yīng)，結(jié)果顯示，與LPS感染文昌魚相比，六種正APPs的濃度變化幅度相對較小，曲線相對平緩，但仍然呈正急性時相反應(yīng)，蛋白電泳也證實(shí)了這一點(diǎn)；而二種負(fù)APPs：RBP和白蛋白(Albumin，ALB)濃度實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)總體呈下降的趨勢，呈負(fù)急性時相反應(yīng)，結(jié)論與上述LPS相同。 第四，我們用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)

7、，探討了LPS感染文昌魚兒茶酚胺類(CAs)神經(jīng)遞質(zhì)的變化，優(yōu)化了同時測定文昌魚體液中NE、E和DA三種CAs的HPLC方法，并首次發(fā)現(xiàn)，文昌魚體液中同時存在NE、E、和DA三種CAs物質(zhì)，其中，E在文昌魚中首次報道，這三種物質(zhì)在LPS感染文昌魚后濃度升高非常明顯，與同期的APPs相比變化更為迅速，也體現(xiàn)了神經(jīng)遞質(zhì)的主導(dǎo)作用，文昌魚的CAs系統(tǒng)也具有了類似脊椎動物CAs系統(tǒng)的功能，可以初步判斷CAs系統(tǒng)的進(jìn)化源頭由脊椎動物可推回到頭索類