田鼠巴貝斯蟲過氧化物氧化還原酶Prx1和Prx的鑒定及功能分析.pdf

1、最近幾年，田鼠巴貝斯蟲(Babesia microti)已成為一個新型的人類病原體，也是世界上的許多地區(qū)人類巴貝斯蟲病的主要病原體。蟲體內的過氧化物氧化還原酶（Peroxiredoxins，Prxs）是細胞中一類表達豐富的蛋白質。Prxs蛋白家族和其它抗氧化蛋白酶，如SOD，Gpx，Trx及TrxR一樣在保護蟲體內的生物大分子免受不利因素的影響方面發(fā)揮著重要作用。Prxs還原過氧化氫主要依賴其高度保守的具有氧化還原活性的Cys。Prxs

2、蛋白被劃分為Prx1，Prx5，Prx6，TPX，PrxQ和AhpE六個亞科，本實驗中研究的是其中的Prx1和PrxQ。雖然這種寄生蟲的Prxs基因組已被測序和注釋，但其生物性特性尚不清楚。
　　本實驗通過分子生物學技術獲得了Prx1和PrxQ全長序列基因，其中Prx1全基因序列長度為594bp，具有一個編碼194個氨基酸的開放閱讀框（ORF），該蛋白無信號肽，利用軟件推測Prx1的蛋白大小約為23kDa。PrxQ全基因序列長度為

3、537bp，具有一個編碼194個氨基酸的ORF，其ORF中有一個信號肽序列，利用軟件推測PrxQ的蛋白大小約為21kDa。我們也成功構建了以pET-30a為載體的重組質粒，并轉化至BL21感受態(tài)細胞中的原核表達系統(tǒng)。通過對誘導條件的摸索，確定在1mM IPTG誘導，200rpm，37℃搖床振蕩培養(yǎng)12h時能獲得大量的重組蛋白，并通過Prx1和PrxQ上清進一步純化獲得了純度較高的重組蛋白，符合進一步實驗的要求。
　　Prx1和Pr

4、xQ重組蛋白活性分析表明證明Prx1和PrxQ蛋白都有活性，但Prx1蛋白活性更高。在構建重組質粒時我們發(fā)現(xiàn)，PrxQ的序列中有一段信號肽，可能這決定了Prx1和PrxQ在細胞中的分布位置不同，從而使兩種蛋白發(fā)揮不同的功能。關于田鼠巴貝斯蟲各種Prxs的具體作用，需要后續(xù)實驗的進一步研究。另外，通過Western blot鑒定和間接免疫熒光實驗（IFAT）分析證明已經(jīng)成功制備了Prx1和PrxQ多抗血清，同時Western blot鑒定