過氧化物氧化還原酶1在LPS誘導急性肺損傷中的功能和作用.pdf

1、背景:
　　急性肺損傷（ALI）及其嚴重階段急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是指心源性以外的各種肺內外致病因素導致的急性的、進行性的呼吸衰竭。ALI基礎病因多樣，其中感染是其主要原因之一。在重癥感染中，致病菌以革蘭陰性菌(G-)占多數(shù)。內毒素是革蘭陰性菌的主要致病成分,抗菌藥物在殺菌抑菌的同時會誘導內毒素的產生,增加了疾病的治療難度。ALI時肺內多種細胞參與炎癥過程，其本質是一種促炎因素和抗炎因素失衡引發(fā)的炎癥反應，多種炎癥介質和細

2、胞因子參與發(fā)病。肺內上皮細胞損傷是急性肺損傷發(fā)生過程中的重要事件,肺上皮細胞不僅作為肺臟的被動生理屏障起到防止外界有害物質的侵入的作用,而且在肺臟的先天性免疫反應中扮演重要的角色。在ALI的發(fā)生發(fā)展的眾多環(huán)節(jié)中，氧化應激反被認為是ALI/ARDS的重要發(fā)病機制之一，氧化反應過度產生的氧自由基可直接攻擊組織細胞、活化免疫細胞進一步加重炎癥。
　　過氧化物氧化還原酶1（peroxiredoxin1,prdx1）屬于抗氧化蛋白超家族中的

3、2-Cysprdx，其在細胞內的主要功能是還原過氧化氫發(fā)揮抗氧化和自由基清除作用。過去的研究中主要集中于prdx1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，近幾年國內外有研究證明過氧化物氧化還原酶家族蛋白與急性肺損傷相關，但在炎癥過程中的具體功能和生物學特性仍不清楚。為研究prdx1蛋白在急性肺損傷炎癥中的功能，本實驗以氣道上皮細胞炎性損傷為模型，通過構建人prdx1蛋白真核表達載體進行基因轉染，使prdx1蛋白在BEAS-2B細胞中沉默表達或穩(wěn)定高表達

4、，然后檢測NFΚB激活轉錄和炎性細胞因子的水平，探討prdx1蛋白在炎癥調控過程中的作用。
　　目的:
　　用LPS誘導氣道上皮細胞BEAS-2B高表達Peroxiredoxin1（prdx1，過氧化物氧化還原酶1），并探討Peroxiredoxin1在急性肺損傷過程中調節(jié)炎癥因子的作用。
　　方法:
　　1，不同來源LPS（大腸桿菌，銅綠假單胞菌）作用beas-2b細胞后，隨著LPS作用濃度的增加，prdx1-

5、mRNA和蛋白的表達亦隨之增加，且呈劑量依賴性，不同濃度組間比較有明顯差異。推測prdx1參與參與調節(jié)炎癥過程，可能作為觀察疾病發(fā)展過程的觀察指標；
　　2，構建prdx1-pMSCV質粒，prdx1mRNA編碼區(qū)序列克隆至pMSCV載體上，轉染至BEAS-2B細胞內，檢測prdx1-mRNA，prdx1蛋白；細胞核內P50、P65；和細胞炎癥因子IL-6、IL-8、TNF-α的表達。
　　3，構建pGPU6/GFP/Neo

6、-shRNA-prdx1質粒，設計shRNA,克隆至pGPU6/GFP/Neo載體，測序驗證后轉染BEAS-2B細胞；檢測prdx1-mRNA，prdx1蛋白；細胞核內P50、P65蛋白和細胞炎癥因子IL-6、IL-8、TNF-αRNA的表達。
　　結果:
　　1，隨著LPS作用濃度的增加，氣道上皮細胞prdx1-mRNA和蛋白的表達亦隨之增加，不同濃度組間比較有明顯差異；細胞核內P50，P65表達增加；LPS；IL-1β，

7、IL-6，IL-8，TNF-α等炎癥介質的高表達；
　　2，Prdx1-pMSCV質粒轉染至細胞內后，細胞內高表達prdx1，Prdx1蛋白增加引起核內P50、P65增加；且引起炎癥介質的表達增加；
　　3，ShRNA-prdx1-531轉染后沉默prdx1蛋白的表達；抑制prdx1蛋白表達后，在LPS刺激條件下核內P50、P65水平降低，炎癥介質的表達降低。
　　結論:
　　1，prdx1蛋白有可能作為急性肺損