利妥昔單抗對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的作用機(jī)制研究.pdf

1、1利妥昔單抗對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的作用機(jī)制研究利妥昔單抗對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的作用機(jī)制研究摘要目的目的:通過(guò)觀察利妥昔單抗(RTX)對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)大鼠發(fā)病情況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變、外周血中B細(xì)胞含量變化以及腦組織中白細(xì)胞介素4(IL4)、白細(xì)胞介素10(IL10)、白細(xì)胞介素17(IL17)、γ干擾素(IFNγ)的含量變化，探討RTX對(duì)EAE的治療作用及其可能的免疫學(xué)機(jī)制，為RTX治療多發(fā)性硬化(MS

2、)尋找充分的理論依據(jù)。方法：方法：1.分組、造模及給藥：采用粗制堿性髓鞘蛋白(CMBP)加福氏完全佐劑(CFA)皮下注射的方法建立EAE模型，EAE模型分為RTX治療組和EAE對(duì)照組，每組10只；正常對(duì)照組10只，按EAE模型組的方法注射生理鹽水及CFA。自造模當(dāng)日開(kāi)始給藥，EAE治療組腹腔注射RTX（200g只天），連續(xù)治療3天，正常對(duì)照組及EAE組腹腔注射生理鹽水0.3mld。于EAE對(duì)照組、RTX治療組連續(xù)3天癥狀評(píng)分無(wú)加重或四肢

3、癱瘓、死亡時(shí)作為EAE發(fā)病高峰期處死發(fā)病大鼠，瀕死大鼠在尚有心跳、體溫時(shí)處死，其余至觀察8周結(jié)束時(shí)全部處死。2.觀察大鼠發(fā)病情況、潛伏期、進(jìn)展期和高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分及死亡率的變化。3.采用光鏡觀察各組大鼠腦及脊髓組織病理變化。4.采用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)外周血B細(xì)胞數(shù)。5.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)腦組織勻漿中IL4、IL10、IL17、IFNγ的含量。6.將EAE組及RTX組各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。7.所有數(shù)據(jù)采用SPSS17

4、.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：結(jié)果：1.大鼠發(fā)病情況：（1）臨床癥狀：正常對(duì)照組大鼠無(wú)異常表現(xiàn)；EAE對(duì)照組及RTX治療組所有大鼠均發(fā)3IL4、IL10的含量與潛伏期呈明顯正相關(guān)(P均0.01)。②EAE對(duì)照組及RTX治療組大鼠外周血B細(xì)胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與進(jìn)展期呈明顯正相關(guān)(P均0.01)；EAE對(duì)照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4、IL10的含量與進(jìn)展期呈明顯負(fù)相關(guān)(P均0.01)。③EAE對(duì)照組及RTX治療

5、組大鼠外周血B細(xì)胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分呈明顯正相關(guān)(P0.05或P0.01)；EAE對(duì)照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4、IL10的含量與高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05或P0.01)。④EAE對(duì)照組及RTX治療組大鼠外周血B細(xì)胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與HE染色病理評(píng)分呈明顯正相關(guān)(P0.05或P0.01)；EAE對(duì)照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4

6、、IL10的含量與HE染色病理評(píng)分呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.05或P0.01)。結(jié)論：結(jié)論：1.采用多點(diǎn)皮下注射WSCHCFA誘導(dǎo)Wistar大鼠，建立EAE模型，EAE大鼠神經(jīng)功能障礙明顯，腦血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)，說(shuō)明Wistar大鼠復(fù)制的急性EAE模型成功，模型穩(wěn)定、可靠。2.RTX能延長(zhǎng)EAE大鼠發(fā)病潛伏期、縮短EAE發(fā)病進(jìn)展期、減輕EAE大鼠神經(jīng)功能障礙、降低EAE動(dòng)物的死亡率、減輕EAE大鼠病理?yè)p害，對(duì)EAE發(fā)病具有保護(hù)作用。3.R