雄激素對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎視神經(jīng)和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的作用.pdf

1、目的：建立大鼠視神經(jīng)炎模型——實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎，探討該模型中雄激素對視神經(jīng)形態(tài)功能和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡的影響。 方法：將雌性Wjstar大鼠隨機分為正常組、未用藥對照組和雄激素組。未用藥對照組每天以安慰劑灌胃，雄激素組每天以0.25 mg/kg甲睪酮灌胃。用藥20天后，未用藥對照組和雄激素組注射完全弗氏佐劑一豚鼠脊髓勻漿，并輔以注射百日咳疫苗(bordetella pertussis vaccine，BPV)誘導(dǎo)EAE

2、模型。誘導(dǎo)前7天，大鼠上丘和外側(cè)膝狀體注射熒光金(nurogold，F(xiàn)G)以逆行標記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retinal ganglion cells，RGCs)。繼續(xù)用藥至誘導(dǎo)后14～30天，取正常鼠和出現(xiàn)癥狀48～72小時內(nèi)的大鼠，應(yīng)用光學顯微鏡和閃光視覺誘發(fā)電位(flashVisualevoked potencial，F(xiàn)vEP)觀察視神經(jīng)形態(tài)和功能的變化；熒光顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜鋪片并計數(shù)RGCs；原位缺口末端標記法(terminal

3、deoxynucleotidyl transferase-mediated biotinylated UTP nick end labeling，TUNEL)觀察RGCs的凋亡情況。 結(jié)果：1．臨床表現(xiàn)：誘導(dǎo)后10天開始，EAE大鼠相繼出現(xiàn)尾無力、松弛、下垂，麻痹以及后肢無力、麻痹甚至死亡等臨床體征，未用藥對照組和雄激素組的EAE發(fā)病率分別為80.0﹪和37.5﹪；兩組的發(fā)病潛伏期分別為12.00±2.02和16.00±1.73

4、天，雄激素組的發(fā)病潛伏期延長(p<0.05)；兩組的EAE癥狀評分分別為2.83±0.94和1.15±0.40，雄激素組的癥狀評分降低(p<0.05)。 2.視神經(jīng)的形態(tài)學和功能改變：未用藥對照組視神經(jīng)纖維走行迂曲呈波浪狀，彌漫脫髓鞘改變；雄激素組視神經(jīng)纖維走行較規(guī)則，脫髓鞘改變不明顯。FVEP結(jié)果：與未用藥對照組相比，雄激素組的N1、P和N2波潛伏期明顯縮短(p<0.05)，N1.P和P-N2振幅提高(p<0.05)。 3.R

5、GCs計數(shù)和凋亡：熒光顯微鏡下計數(shù)RGCs：正常組、未用藥對照組和雄激素組RGCs計數(shù)分別為2284±132/mm<'2>， 934±78/mm<'2>和1725±95/mm<'2>，各組間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。nYNEL法觀察RGCs的凋亡情況：正常組、未用藥對照組和雄激素組每高倍視野(×400)的nYNEL陽性細胞數(shù)分別為4.02±O.16個、24.44±2.22個和9.84±2.36個，各組間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.