角膜血管膜上皮細胞表型鑒定及新生血管相關靶點的篩選.pdf

1、目的:通過鑒定臨床角膜血管膜標本的上皮細胞表型,檢測新生血管相關因子的表達情況,探討Avastin等抗VEGF藥物治療角膜新生血管療效差異懸殊的可能原因,篩選角膜新生血管治療相關的靶點因子,并通過小鼠角膜新生血管模型進行驗證。
　　 方法:本研究共收集26例新生血管性角膜病患者的角膜新生血管膜組織,包括一次血管膜組織19例,其中化學傷8例、熱燒傷7例、爆竹炸傷3例、眼瘢痕性類天皰瘡1例;二次血管膜組織7例,其中化學傷5例、熱燒傷

2、1例、Stevens-Johnson綜合癥1例。通過免疫組織化學方法,檢測血管膜中上皮細胞的表型,并與角膜和結膜上皮進行比較。應用基因表達芯片篩選血管膜中高表達的新生血管調(diào)控因子,并通過實時定量PCR進行驗證。最后,通過建立縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導的小鼠角膜新生血管模型,觀察角膜新生血管的動態(tài)生長情況,檢測VEGF等新生血管關鍵調(diào)控因子的表達變化,對臨床標本的結果進行驗證。
　　 結果:通過免疫組織化學染色對一次和二次血

3、管膜組織的上皮細胞進行表型鑒定,發(fā)現(xiàn)血管膜的上皮表現(xiàn)為角蛋白CK3-、CK19+、P63+/-,與正常結膜上皮的表型類似。在24例臨床血管膜標本中(化學傷13例、熱燒傷8例、爆竹炸傷3例),篩選并驗證出15個新生血管相關的關鍵調(diào)控因子,但均未檢測到VEGF的高表達。通過對縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導的角膜新生血管小鼠模型的檢測發(fā)現(xiàn),四種模型的小鼠角膜中VEGF的表達呈現(xiàn)相似的變化趨勢,術后早期(1-14天)VEGF表達均有不同程度的

4、增高,但隨后迅速降低至正常水平。通過對臨床標本篩選出的15個新生血管調(diào)控因子的驗證,發(fā)現(xiàn)其中11個因子在小鼠模型中呈現(xiàn)相似的表達趨勢,按功能分為生長因子類(PLXDC1、TGFB2、EREG)、細胞因子及受體類(IL6、IL1β、TNFRSF12a)、蛋白酶類(MMP2、FAP)、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(NOTCH4、HEY2)和SFRP2。
　　 結論:臨床新生血管性角膜病患者的角膜血管膜組織,其上皮均呈現(xiàn)結膜表型,但血管膜組織中